生物学杂志
生物學雜誌
생물학잡지
JOURNAL OF BIOLOGY
2011年
3期
58-62
,共5页
卢晨%赵辉%邹文艺%范清林%付永标%宋礼华
盧晨%趙輝%鄒文藝%範清林%付永標%宋禮華
로신%조휘%추문예%범청림%부영표%송례화
人干扰素α-2b%STⅡ信号肽%分泌%大肠杆菌 W3110
人榦擾素α-2b%STⅡ信號肽%分泌%大腸桿菌 W3110
인간우소α-2b%STⅡ신호태%분비%대장간균 W3110
人干扰素α-2b原始基因在重组原核工程菌中表达量偏低,所以我们在不改变干扰素原有氨基酸组成的前提下,根据大肠杆菌密码子偏爱性使用定向突变技术对huIFNα-2b基因进行点突变.将大肠杆菌STⅡ信号肽基因与突变后huIFNα-2b基因融合并于信号肽5'端和huIFNα-2b基因3'端引入合适的酶切位点.融合基因克隆至载体pCSE,pET-22b和pPAK4L中,此3种载体分别含有组成型启动子、T7启动子和phoA启动子.融合基因在载体pCSE中表达量很低,其中约有50%的目标蛋白能够成功实现分泌.在E.coli BL21中,pET-22b经过IPTG诱导可以实现huIFNα-2b的高表达,但STⅡ信号肽不能被有效切除.含有phoA启动子的载体pPAK4L其在E.coli W3110中可以实现huIFNα-2b较高水平的分泌表达,经过低磷诱导其表达量最高可至20μ/g/mL(A550)菌液,约有30%的目标蛋白质信号肽能够被成功切除并分泌到胞间质中.
人榦擾素α-2b原始基因在重組原覈工程菌中錶達量偏低,所以我們在不改變榦擾素原有氨基痠組成的前提下,根據大腸桿菌密碼子偏愛性使用定嚮突變技術對huIFNα-2b基因進行點突變.將大腸桿菌STⅡ信號肽基因與突變後huIFNα-2b基因融閤併于信號肽5'耑和huIFNα-2b基因3'耑引入閤適的酶切位點.融閤基因剋隆至載體pCSE,pET-22b和pPAK4L中,此3種載體分彆含有組成型啟動子、T7啟動子和phoA啟動子.融閤基因在載體pCSE中錶達量很低,其中約有50%的目標蛋白能夠成功實現分泌.在E.coli BL21中,pET-22b經過IPTG誘導可以實現huIFNα-2b的高錶達,但STⅡ信號肽不能被有效切除.含有phoA啟動子的載體pPAK4L其在E.coli W3110中可以實現huIFNα-2b較高水平的分泌錶達,經過低燐誘導其錶達量最高可至20μ/g/mL(A550)菌液,約有30%的目標蛋白質信號肽能夠被成功切除併分泌到胞間質中.
인간우소α-2b원시기인재중조원핵공정균중표체량편저,소이아문재불개변간우소원유안기산조성적전제하,근거대장간균밀마자편애성사용정향돌변기술대huIFNα-2b기인진행점돌변.장대장간균STⅡ신호태기인여돌변후huIFNα-2b기인융합병우신호태5'단화huIFNα-2b기인3'단인입합괄적매절위점.융합기인극륭지재체pCSE,pET-22b화pPAK4L중,차3충재체분별함유조성형계동자、T7계동자화phoA계동자.융합기인재재체pCSE중표체량흔저,기중약유50%적목표단백능구성공실현분비.재E.coli BL21중,pET-22b경과IPTG유도가이실현huIFNα-2b적고표체,단STⅡ신호태불능피유효절제.함유phoA계동자적재체pPAK4L기재E.coli W3110중가이실현huIFNα-2b교고수평적분비표체,경과저린유도기표체량최고가지20μ/g/mL(A550)균액,약유30%적목표단백질신호태능구피성공절제병분비도포간질중.
