实用老年医学
實用老年醫學
실용노년의학
PRACTICAL GERIATRICS
2011年
5期
378-381
,共4页
李燕%迟莹%卞倩%温恬%张文帅%焦永军
李燕%遲瑩%卞倩%溫恬%張文帥%焦永軍
리연%지형%변천%온념%장문수%초영군
甲型SWH1N1流感病毒%HA1基因%克隆%杆状病毒真核表达系统%蛋白纯化
甲型SWH1N1流感病毒%HA1基因%剋隆%桿狀病毒真覈錶達繫統%蛋白純化
갑형SWH1N1류감병독%HA1기인%극륭%간상병독진핵표체계통%단백순화
目的 构建甲型SWH1N1流感病毒血凝素HA1蛋白的杆状病毒真核表达载体,转染sf9细胞表达并纯化其编码蛋白.方法 从江苏甲型H1N1流感病毒毒株[A/Jiangsu/1/2009( H1N1)]提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增HA1基因,将其克隆至pMD18-T Simple Vector中构建pMD18-T/HA1质粒,双酶切pMD18-T/HA1与p-fast后,连接构建真核表达载体p-fast-HA1,转化DH10Bac细胞,转座构建杆状病毒HA1-Bacmid,经酶切及测序鉴定后将HA1 -Bacmid转染到sf9细胞中,通过免疫印迹法鉴定HA1蛋白的表达,采用亲和层析法纯化HAl蛋白.结果 经双酶切、测序鉴定证实HA1基因的真核表达载体构建成功；免疫印迹法证实HA1基因的表达；纯化获得了高纯度的HA1蛋白.结论 成功克隆了HA1基因,并构建了其杆状病毒真核表达载体,该表达载体的构建为后期的流感快速检测以及基因工程疫苗制备奠定了良好的基础.
目的 構建甲型SWH1N1流感病毒血凝素HA1蛋白的桿狀病毒真覈錶達載體,轉染sf9細胞錶達併純化其編碼蛋白.方法 從江囌甲型H1N1流感病毒毒株[A/Jiangsu/1/2009( H1N1)]提取病毒RNA,採用RT-PCR技術擴增HA1基因,將其剋隆至pMD18-T Simple Vector中構建pMD18-T/HA1質粒,雙酶切pMD18-T/HA1與p-fast後,連接構建真覈錶達載體p-fast-HA1,轉化DH10Bac細胞,轉座構建桿狀病毒HA1-Bacmid,經酶切及測序鑒定後將HA1 -Bacmid轉染到sf9細胞中,通過免疫印跡法鑒定HA1蛋白的錶達,採用親和層析法純化HAl蛋白.結果 經雙酶切、測序鑒定證實HA1基因的真覈錶達載體構建成功；免疫印跡法證實HA1基因的錶達；純化穫得瞭高純度的HA1蛋白.結論 成功剋隆瞭HA1基因,併構建瞭其桿狀病毒真覈錶達載體,該錶達載體的構建為後期的流感快速檢測以及基因工程疫苗製備奠定瞭良好的基礎.
목적 구건갑형SWH1N1류감병독혈응소HA1단백적간상병독진핵표체재체,전염sf9세포표체병순화기편마단백.방법 종강소갑형H1N1류감병독독주[A/Jiangsu/1/2009( H1N1)]제취병독RNA,채용RT-PCR기술확증HA1기인,장기극륭지pMD18-T Simple Vector중구건pMD18-T/HA1질립,쌍매절pMD18-T/HA1여p-fast후,련접구건진핵표체재체p-fast-HA1,전화DH10Bac세포,전좌구건간상병독HA1-Bacmid,경매절급측서감정후장HA1 -Bacmid전염도sf9세포중,통과면역인적법감정HA1단백적표체,채용친화층석법순화HAl단백.결과 경쌍매절、측서감정증실HA1기인적진핵표체재체구건성공；면역인적법증실HA1기인적표체；순화획득료고순도적HA1단백.결론 성공극륭료HA1기인,병구건료기간상병독진핵표체재체,해표체재체적구건위후기적류감쾌속검측이급기인공정역묘제비전정료량호적기출.
