中华病理学杂志
中華病理學雜誌
중화병이학잡지
Chinese Journal of Pathology
2005年
1期
15-21
,共7页
裴斐%由江峰%宁钧宇%杨京平%王玉萍%韩志惠%王洁良%崔湘霖%杨邵敏%郑杰
裴斐%由江峰%寧鈞宇%楊京平%王玉萍%韓誌惠%王潔良%崔湘霖%楊邵敏%鄭傑
배비%유강봉%저균우%양경평%왕옥평%한지혜%왕길량%최상림%양소민%정걸
乳腺肿瘤%结肠肿瘤%肿瘤转移%抗体,单克隆%癌,组织多肽抗原
乳腺腫瘤%結腸腫瘤%腫瘤轉移%抗體,單剋隆%癌,組織多肽抗原
유선종류%결장종류%종류전이%항체,단극륭%암,조직다태항원
目的明确人肿瘤转移抑制基因TMSG-1蛋白分子量大小和细胞定位,制备和鉴定TMSG-1单克隆抗体,并探讨其在临床肿瘤标本检测的价值.方法采用多肽固相合成法(Fmoc法)合成15肽TMSG-1抗原片段,并与匙孔槭血蓝蛋白(mcKLH)偶联,免疫BAL B/C小鼠,采用细胞融合、ELISA法检测和快速有限稀释法筛选和制备单克隆抗体,并应用Western印迹和免疫组织化学ABC法染色进行抗体鉴定和肿瘤检测.结果筛选出抗TMSG-1抗体的单克隆杂交瘤细胞系C8,免疫球蛋白亚类测定为IgM.半抗原竞争抑制实验证实该抗体是特异的抗TMSG-1抗体.Western印迹显示不转移癌细胞亚系2B4和LH7有明显的相对分子质量为45 000蛋白条带,而高转移亚系1E8和BE1则条带很弱.细胞免疫组织化学染色显示2B4和LH7强阳性,为细胞膜和细胞质着色;而1E8和BE1则为阴性.石蜡切片ABC法检测52例乳腺癌和41例结肠癌组织中TMSG-1蛋白表达发现:未转移的癌组织多为中度阳性或强阳性,中度以上阳性率分别为36%(乳腺癌)和52.4%(结肠癌);而转移的癌组织多为弱阳性或阴性, 中度以上阳性率分别为7.4%(乳腺癌)和35%(结肠癌),统计学分析表明TMSG-1在未转移癌组织中的表达显著高于转移性癌组织(P<0.05).结论成功制备了抗人肿瘤转移抑制基因TMSG-1单克隆抗体,能应用于Western印迹和免疫组织化学以检测癌细胞和癌组织中TMSG-1蛋白的表达.并证实:(1)TMSG-1蛋白相对分子质量为45 000,支持编码380个氨基酸;(2)TMSG-1蛋白定位于癌细胞的细胞膜和细胞质;(3)TMSG-1蛋白的表达与肿瘤转移潜能明显负相关,提示TMSG-1基因是一个新的肿瘤转移抑制基因.
目的明確人腫瘤轉移抑製基因TMSG-1蛋白分子量大小和細胞定位,製備和鑒定TMSG-1單剋隆抗體,併探討其在臨床腫瘤標本檢測的價值.方法採用多肽固相閤成法(Fmoc法)閤成15肽TMSG-1抗原片段,併與匙孔槭血藍蛋白(mcKLH)偶聯,免疫BAL B/C小鼠,採用細胞融閤、ELISA法檢測和快速有限稀釋法篩選和製備單剋隆抗體,併應用Western印跡和免疫組織化學ABC法染色進行抗體鑒定和腫瘤檢測.結果篩選齣抗TMSG-1抗體的單剋隆雜交瘤細胞繫C8,免疫毬蛋白亞類測定為IgM.半抗原競爭抑製實驗證實該抗體是特異的抗TMSG-1抗體.Western印跡顯示不轉移癌細胞亞繫2B4和LH7有明顯的相對分子質量為45 000蛋白條帶,而高轉移亞繫1E8和BE1則條帶很弱.細胞免疫組織化學染色顯示2B4和LH7彊暘性,為細胞膜和細胞質著色;而1E8和BE1則為陰性.石蠟切片ABC法檢測52例乳腺癌和41例結腸癌組織中TMSG-1蛋白錶達髮現:未轉移的癌組織多為中度暘性或彊暘性,中度以上暘性率分彆為36%(乳腺癌)和52.4%(結腸癌);而轉移的癌組織多為弱暘性或陰性, 中度以上暘性率分彆為7.4%(乳腺癌)和35%(結腸癌),統計學分析錶明TMSG-1在未轉移癌組織中的錶達顯著高于轉移性癌組織(P<0.05).結論成功製備瞭抗人腫瘤轉移抑製基因TMSG-1單剋隆抗體,能應用于Western印跡和免疫組織化學以檢測癌細胞和癌組織中TMSG-1蛋白的錶達.併證實:(1)TMSG-1蛋白相對分子質量為45 000,支持編碼380箇氨基痠;(2)TMSG-1蛋白定位于癌細胞的細胞膜和細胞質;(3)TMSG-1蛋白的錶達與腫瘤轉移潛能明顯負相關,提示TMSG-1基因是一箇新的腫瘤轉移抑製基因.
목적명학인종류전이억제기인TMSG-1단백분자량대소화세포정위,제비화감정TMSG-1단극륭항체,병탐토기재림상종류표본검측적개치.방법채용다태고상합성법(Fmoc법)합성15태TMSG-1항원편단,병여시공축혈람단백(mcKLH)우련,면역BAL B/C소서,채용세포융합、ELISA법검측화쾌속유한희석법사선화제비단극륭항체,병응용Western인적화면역조직화학ABC법염색진행항체감정화종류검측.결과사선출항TMSG-1항체적단극륭잡교류세포계C8,면역구단백아류측정위IgM.반항원경쟁억제실험증실해항체시특이적항TMSG-1항체.Western인적현시불전이암세포아계2B4화LH7유명현적상대분자질량위45 000단백조대,이고전이아계1E8화BE1칙조대흔약.세포면역조직화학염색현시2B4화LH7강양성,위세포막화세포질착색;이1E8화BE1칙위음성.석사절편ABC법검측52례유선암화41례결장암조직중TMSG-1단백표체발현:미전이적암조직다위중도양성혹강양성,중도이상양성솔분별위36%(유선암)화52.4%(결장암);이전이적암조직다위약양성혹음성, 중도이상양성솔분별위7.4%(유선암)화35%(결장암),통계학분석표명TMSG-1재미전이암조직중적표체현저고우전이성암조직(P<0.05).결론성공제비료항인종류전이억제기인TMSG-1단극륭항체,능응용우Western인적화면역조직화학이검측암세포화암조직중TMSG-1단백적표체.병증실:(1)TMSG-1단백상대분자질량위45 000,지지편마380개안기산;(2)TMSG-1단백정위우암세포적세포막화세포질;(3)TMSG-1단백적표체여종류전이잠능명현부상관,제시TMSG-1기인시일개신적종류전이억제기인.
