细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2004年
5期
568-571
,共4页
晁开%何丹%杨慧%张众%林晴%郭蔼光%黄华樑
晁開%何丹%楊慧%張衆%林晴%郭藹光%黃華樑
조개%하단%양혜%장음%림청%곽애광%황화량
免疫毒素%膀胱癌%FkpA%可溶性表达%亲和层析%细胞毒性
免疫毒素%膀胱癌%FkpA%可溶性錶達%親和層析%細胞毒性
면역독소%방광암%FkpA%가용성표체%친화층석%세포독성
目的:构建抗膀胱癌重组免疫毒素BDI-1-PE38/KDEL的可溶性表达载体,并表达、纯化具有抗肿瘤活性的可溶性蛋白.方法:将抗膀胱癌重组免疫毒素BDI-1-PE38/KDEL的基因片段,插入含有大肠杆菌脯氨酰顺反异构酶FkpA基因的共表达载体pTMFK中,构建重组共表达载体pTMFK-IT.以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)-Star,共表达目的蛋白与Fk-pA.表达产物以镍离子金属螯合层析柱及抗PE抗体亲和柱层析进行纯化.用ELISA检测免疫毒素的抗原结合活性,用噻唑蓝(MTT)法进行体外细胞杀伤实验.结果:成功地构建了抗膀胱癌免疫毒素基因与FkpA基因的共表达载体,并获得纯度较高的目的表达产物.纯化后的表达产物与BIU-87膀胱癌细胞膜抗原具有良好的特异性结合活性,对BIU-87膀胱癌细胞有明显的体外特异性杀伤作用.结论:获得了对膀胱癌细胞具有显著特异性杀伤活性的免疫毒素,为将其进一步应用于膀胱癌的靶向治疗研究奠定了基础.
目的:構建抗膀胱癌重組免疫毒素BDI-1-PE38/KDEL的可溶性錶達載體,併錶達、純化具有抗腫瘤活性的可溶性蛋白.方法:將抗膀胱癌重組免疫毒素BDI-1-PE38/KDEL的基因片段,插入含有大腸桿菌脯氨酰順反異構酶FkpA基因的共錶達載體pTMFK中,構建重組共錶達載體pTMFK-IT.以重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)-Star,共錶達目的蛋白與Fk-pA.錶達產物以鎳離子金屬螯閤層析柱及抗PE抗體親和柱層析進行純化.用ELISA檢測免疫毒素的抗原結閤活性,用噻唑藍(MTT)法進行體外細胞殺傷實驗.結果:成功地構建瞭抗膀胱癌免疫毒素基因與FkpA基因的共錶達載體,併穫得純度較高的目的錶達產物.純化後的錶達產物與BIU-87膀胱癌細胞膜抗原具有良好的特異性結閤活性,對BIU-87膀胱癌細胞有明顯的體外特異性殺傷作用.結論:穫得瞭對膀胱癌細胞具有顯著特異性殺傷活性的免疫毒素,為將其進一步應用于膀胱癌的靶嚮治療研究奠定瞭基礎.
목적:구건항방광암중조면역독소BDI-1-PE38/KDEL적가용성표체재체,병표체、순화구유항종류활성적가용성단백.방법:장항방광암중조면역독소BDI-1-PE38/KDEL적기인편단,삽입함유대장간균포안선순반이구매FkpA기인적공표체재체pTMFK중,구건중조공표체재체pTMFK-IT.이중조질립전화대장간균BL21(DE3)-Star,공표체목적단백여Fk-pA.표체산물이얼리자금속오합층석주급항PE항체친화주층석진행순화.용ELISA검측면역독소적항원결합활성,용새서람(MTT)법진행체외세포살상실험.결과:성공지구건료항방광암면역독소기인여FkpA기인적공표체재체,병획득순도교고적목적표체산물.순화후적표체산물여BIU-87방광암세포막항원구유량호적특이성결합활성,대BIU-87방광암세포유명현적체외특이성살상작용.결론:획득료대방광암세포구유현저특이성살상활성적면역독소,위장기진일보응용우방광암적파향치료연구전정료기출.
