中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2005年
8期
70-75
,共6页
史悦%于慧敏%田卓玲%沈忠耀
史悅%于慧敏%田卓玲%瀋忠耀
사열%우혜민%전탁령%침충요
腈水合酶%重组大肠杆菌%质粒稳定性%分离不稳定性%质粒拷贝数
腈水閤酶%重組大腸桿菌%質粒穩定性%分離不穩定性%質粒拷貝數
정수합매%중조대장간균%질립은정성%분리불은정성%질립고패수
成功构建了腈水合酶(nitrile hydratase,NHase)高表达的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pETNHM(Kanr),研究了重组质粒pETNHM在重组菌株中的质粒稳定性.结果表明,pETNHM具有较好的结构稳定性,连续传代60代后质粒的基因序列没有明显缺失,且能够正常表达腈水合酶.pETNHM具有分离不稳定性,在无抗生素选择压力下,连续传代48代后质粒丢失的无质粒细胞开始出现.琼脂糖凝胶电泳定量分析表明,2/3的质粒pETNHM以二聚体形式存在,导致质粒拷贝数的下降.进一步研究表明,重组细胞的连续高速分裂及腈水合酶的高表达也会造成质粒拷贝数的下降,从而降低其分离稳定性.反之,重组菌株相对于宿主菌株的较高比生长速率有利于保持含质粒细胞的生长优势,卡那霉素的选择压力则能够保证质粒的稳定遗传.
成功構建瞭腈水閤酶(nitrile hydratase,NHase)高錶達的重組大腸桿菌E.coli BL21(DE3)/pETNHM(Kanr),研究瞭重組質粒pETNHM在重組菌株中的質粒穩定性.結果錶明,pETNHM具有較好的結構穩定性,連續傳代60代後質粒的基因序列沒有明顯缺失,且能夠正常錶達腈水閤酶.pETNHM具有分離不穩定性,在無抗生素選擇壓力下,連續傳代48代後質粒丟失的無質粒細胞開始齣現.瓊脂糖凝膠電泳定量分析錶明,2/3的質粒pETNHM以二聚體形式存在,導緻質粒拷貝數的下降.進一步研究錶明,重組細胞的連續高速分裂及腈水閤酶的高錶達也會造成質粒拷貝數的下降,從而降低其分離穩定性.反之,重組菌株相對于宿主菌株的較高比生長速率有利于保持含質粒細胞的生長優勢,卡那黴素的選擇壓力則能夠保證質粒的穩定遺傳.
성공구건료정수합매(nitrile hydratase,NHase)고표체적중조대장간균E.coli BL21(DE3)/pETNHM(Kanr),연구료중조질립pETNHM재중조균주중적질립은정성.결과표명,pETNHM구유교호적결구은정성,련속전대60대후질립적기인서렬몰유명현결실,차능구정상표체정수합매.pETNHM구유분리불은정성,재무항생소선택압력하,련속전대48대후질립주실적무질립세포개시출현.경지당응효전영정량분석표명,2/3적질립pETNHM이이취체형식존재,도치질립고패수적하강.진일보연구표명,중조세포적련속고속분렬급정수합매적고표체야회조성질립고패수적하강,종이강저기분리은정성.반지,중조균주상대우숙주균주적교고비생장속솔유리우보지함질립세포적생장우세,잡나매소적선택압력칙능구보증질립적은정유전.
