解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2006年
7期
679-682
,共4页
马群风%江红%刘锟%朱捷%郑晓飞
馬群風%江紅%劉錕%硃捷%鄭曉飛
마군풍%강홍%류곤%주첩%정효비
白细胞介素24%黑素瘤分化相关基因-7%重组腺病毒%癌,小细胞%细胞增殖
白細胞介素24%黑素瘤分化相關基因-7%重組腺病毒%癌,小細胞%細胞增殖
백세포개소24%흑소류분화상관기인-7%중조선병독%암,소세포%세포증식
目的构建mda-7/IL-24腺病毒,检测其对小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖的影响.方法将mda-7/IL-24 cDNA亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,在大肠杆菌BJ 5183中将重组病毒穿梭质粒和骨架质粒重组.在HEK293细胞中进行病毒包装和扩增,用PCR方法鉴定后,通过TCID50法测定病毒滴度.用滴度为50pfu/细胞的重组腺病毒Ad.mda-7/IL-24感染NCI-H446细胞72h后,经MTT实验检测其对细胞增殖的影响,并用Western blot方法检测mda-7/IL-24在NCI-446中的表达.结果核酸序列测定和PCR鉴定表明成功构建Ad.mda-7/IL-24;TCID50法测定扩增的腺病毒滴度为2×1010pfu/ml.Ad.mda-7/IL-24在NCI-H446细胞中表达MDA-7/IL-24,MTT检测表明Ad.mda-7/IL-24明显抑制NCI-H446细胞生长,抑制率为21.37%.结论重组腺病毒Ad.mda-7/IL-24能显著抑制NCI-H446细胞增殖,为研究mda-7/IL-24的作用机制及将其用于小细胞肺癌的基因治疗提供了条件.
目的構建mda-7/IL-24腺病毒,檢測其對小細胞肺癌NCI-H446細胞增殖的影響.方法將mda-7/IL-24 cDNA亞剋隆至腺病毒穿梭質粒載體pAdTrack-CMV中,在大腸桿菌BJ 5183中將重組病毒穿梭質粒和骨架質粒重組.在HEK293細胞中進行病毒包裝和擴增,用PCR方法鑒定後,通過TCID50法測定病毒滴度.用滴度為50pfu/細胞的重組腺病毒Ad.mda-7/IL-24感染NCI-H446細胞72h後,經MTT實驗檢測其對細胞增殖的影響,併用Western blot方法檢測mda-7/IL-24在NCI-446中的錶達.結果覈痠序列測定和PCR鑒定錶明成功構建Ad.mda-7/IL-24;TCID50法測定擴增的腺病毒滴度為2×1010pfu/ml.Ad.mda-7/IL-24在NCI-H446細胞中錶達MDA-7/IL-24,MTT檢測錶明Ad.mda-7/IL-24明顯抑製NCI-H446細胞生長,抑製率為21.37%.結論重組腺病毒Ad.mda-7/IL-24能顯著抑製NCI-H446細胞增殖,為研究mda-7/IL-24的作用機製及將其用于小細胞肺癌的基因治療提供瞭條件.
목적구건mda-7/IL-24선병독,검측기대소세포폐암NCI-H446세포증식적영향.방법장mda-7/IL-24 cDNA아극륭지선병독천사질립재체pAdTrack-CMV중,재대장간균BJ 5183중장중조병독천사질립화골가질립중조.재HEK293세포중진행병독포장화확증,용PCR방법감정후,통과TCID50법측정병독적도.용적도위50pfu/세포적중조선병독Ad.mda-7/IL-24감염NCI-H446세포72h후,경MTT실험검측기대세포증식적영향,병용Western blot방법검측mda-7/IL-24재NCI-446중적표체.결과핵산서렬측정화PCR감정표명성공구건Ad.mda-7/IL-24;TCID50법측정확증적선병독적도위2×1010pfu/ml.Ad.mda-7/IL-24재NCI-H446세포중표체MDA-7/IL-24,MTT검측표명Ad.mda-7/IL-24명현억제NCI-H446세포생장,억제솔위21.37%.결론중조선병독Ad.mda-7/IL-24능현저억제NCI-H446세포증식,위연구mda-7/IL-24적작용궤제급장기용우소세포폐암적기인치료제공료조건.
