四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2008年
4期
654-657
,共4页
芦小燕%解慧琪%李莉%智伟%陈晓禾%邓力
蘆小燕%解慧琪%李莉%智偉%陳曉禾%鄧力
호소연%해혜기%리리%지위%진효화%산력
人成纤维细胞%稳定转染%电转染%阳离子聚合物转染%阳离子脂质体转染
人成纖維細胞%穩定轉染%電轉染%暘離子聚閤物轉染%暘離子脂質體轉染
인성섬유세포%은정전염%전전염%양리자취합물전염%양리자지질체전염
目的 采用3种不同的方法将质粒pEGFP-N1,转染人成纤维细胞,从中寻找最佳的稳定转染的方法.方法 分别采用阳离子聚合物转染、阳离子脂质体转染和电转染方法,将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞.24 h后,荧光显微镜下观察EGFP表达,流式细胞术测定瞬时转染率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞.结果 电转染有最高的瞬时转染效率(56.8%),稳定转染得到的阳性克隆最多,且从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间也最少(约20 d);用阳离子聚合物瞬时转染率低(1.7%),稳定筛选同样可以得到阳性大克隆,但是数量很少且从细胞筛选到扩增至阳性大克隆所用的时间也最多(约30 d);阳离子脂质体转染效果居中,瞬时转染率为39.9%,从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间约25 d.结论 用电转染法将质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞是最佳的转染方法.
目的 採用3種不同的方法將質粒pEGFP-N1,轉染人成纖維細胞,從中尋找最佳的穩定轉染的方法.方法 分彆採用暘離子聚閤物轉染、暘離子脂質體轉染和電轉染方法,將能錶達G418抗性蛋白和增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)的質粒pEGFP-N1轉染人成纖維細胞.24 h後,熒光顯微鏡下觀察EGFP錶達,流式細胞術測定瞬時轉染率;通過G418篩選得到穩定轉染的細胞.結果 電轉染有最高的瞬時轉染效率(56.8%),穩定轉染得到的暘性剋隆最多,且從細胞篩選到擴增至得到暘性大剋隆所用的時間也最少(約20 d);用暘離子聚閤物瞬時轉染率低(1.7%),穩定篩選同樣可以得到暘性大剋隆,但是數量很少且從細胞篩選到擴增至暘性大剋隆所用的時間也最多(約30 d);暘離子脂質體轉染效果居中,瞬時轉染率為39.9%,從細胞篩選到擴增至得到暘性大剋隆所用的時間約25 d.結論 用電轉染法將質粒pEGFP-N1轉染人成纖維細胞是最佳的轉染方法.
목적 채용3충불동적방법장질립pEGFP-N1,전염인성섬유세포,종중심조최가적은정전염적방법.방법 분별채용양리자취합물전염、양리자지질체전염화전전염방법,장능표체G418항성단백화증강형록색형광단백(EGFP)적질립pEGFP-N1전염인성섬유세포.24 h후,형광현미경하관찰EGFP표체,류식세포술측정순시전염솔;통과G418사선득도은정전염적세포.결과 전전염유최고적순시전염효솔(56.8%),은정전염득도적양성극륭최다,차종세포사선도확증지득도양성대극륭소용적시간야최소(약20 d);용양리자취합물순시전염솔저(1.7%),은정사선동양가이득도양성대극륭,단시수량흔소차종세포사선도확증지양성대극륭소용적시간야최다(약30 d);양리자지질체전염효과거중,순시전염솔위39.9%,종세포사선도확증지득도양성대극륭소용적시간약25 d.결론 용전전염법장질립pEGFP-N1전염인성섬유세포시최가적전염방법.
