上海交通大学学报(农业科学版)
上海交通大學學報(農業科學版)
상해교통대학학보(농업과학판)
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)
2005年
4期
353-359
,共7页
崔立%朱建国%芦银华%谈国蕾%陈溥言%华修国
崔立%硃建國%蘆銀華%談國蕾%陳溥言%華脩國
최립%주건국%호은화%담국뢰%진부언%화수국
猪圆环病毒2型%Cap蛋白%大肠杆菌%表达
豬圓環病毒2型%Cap蛋白%大腸桿菌%錶達
저원배병독2형%Cap단백%대장간균%표체
用PK-15细胞增殖PCV-2病毒,提取病毒DNA,用PCR方法扩增核衣壳蛋白(Cap蛋白)全基因,克隆到pET-32a载体中,构建了表达载体pETORF2,转化入大肠杆菌BL21中,用IPTG进行诱导表达,结果显示表达的蛋白大小与设计不符.同样的方法,又构建了表达载体pETRF2,含有Cap蛋白的部分基因,结果显示表达的蛋白大小依然与设计不符.对Cap蛋白编码基因进行改造,在不改变原氨基酸序列的基础上,把其编码密码子全部换成大肠杆菌偏爱密码子,根据此序列,设计了4条长引物,参照SOE的原理,用降落PCR的方法扩增出含Cap蛋白表位基因的片段,并克隆到pET-32a载体中,成功构建了重组表达载体pETP1P4.SDS-PAGE电泳结果表明,表达的蛋白分子量与设计相符.
用PK-15細胞增殖PCV-2病毒,提取病毒DNA,用PCR方法擴增覈衣殼蛋白(Cap蛋白)全基因,剋隆到pET-32a載體中,構建瞭錶達載體pETORF2,轉化入大腸桿菌BL21中,用IPTG進行誘導錶達,結果顯示錶達的蛋白大小與設計不符.同樣的方法,又構建瞭錶達載體pETRF2,含有Cap蛋白的部分基因,結果顯示錶達的蛋白大小依然與設計不符.對Cap蛋白編碼基因進行改造,在不改變原氨基痠序列的基礎上,把其編碼密碼子全部換成大腸桿菌偏愛密碼子,根據此序列,設計瞭4條長引物,參照SOE的原理,用降落PCR的方法擴增齣含Cap蛋白錶位基因的片段,併剋隆到pET-32a載體中,成功構建瞭重組錶達載體pETP1P4.SDS-PAGE電泳結果錶明,錶達的蛋白分子量與設計相符.
용PK-15세포증식PCV-2병독,제취병독DNA,용PCR방법확증핵의각단백(Cap단백)전기인,극륭도pET-32a재체중,구건료표체재체pETORF2,전화입대장간균BL21중,용IPTG진행유도표체,결과현시표체적단백대소여설계불부.동양적방법,우구건료표체재체pETRF2,함유Cap단백적부분기인,결과현시표체적단백대소의연여설계불부.대Cap단백편마기인진행개조,재불개변원안기산서렬적기출상,파기편마밀마자전부환성대장간균편애밀마자,근거차서렬,설계료4조장인물,삼조SOE적원리,용강락PCR적방법확증출함Cap단백표위기인적편단,병극륭도pET-32a재체중,성공구건료중조표체재체pETP1P4.SDS-PAGE전영결과표명,표체적단백분자량여설계상부.
