细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2006年
1期
22-25
,共4页
房雪峰%王立新%孟继鸿%董晨%田华%翟理杰
房雪峰%王立新%孟繼鴻%董晨%田華%翟理傑
방설봉%왕립신%맹계홍%동신%전화%적리걸
戊型肝炎病毒%基因免疫%中和抗原表位%基因表达
戊型肝炎病毒%基因免疫%中和抗原錶位%基因錶達
무형간염병독%기인면역%중화항원표위%기인표체
目的:比较不同载体和不同大小的目的基因片段对戊型肝炎病毒(HEV)基因免疫抗原表达的影响,为基于HEV中和抗原表位的HEV基因免疫提供一定的依据.方法:将含Ⅳ型HEV中国株中和抗原表位的p166和p179片段编码基因分别克隆入pTR421和pCDNA3.1两种真核表达载体,用脂质体介导基因转染HepG2人肝癌细胞系,经间接免疫荧光和Western blot分析以及将质粒注射小鼠局部肌肉组织后经免疫组织化学染色检测,分析目的基因在体内外的表达水平.结果:成功构建了pTR421-166、pTR421-179、pCDNA3.1-166和pCDNA3.1-179四种重组质粒,经限制性内切酶双酶切和核苷酸测序鉴定,编码基因正确无误;pTR421-179转染的细胞以及注射小鼠的局部肌肉组织可以检测到p179的表达,而pCDNA3.1-179、pCDNA3.1-166以及pTR421-166均检测不到目的基因在体内、外的抗原表达.结论:载体和目的基因片段的选择显著影响HEV抗原在体内、外的表达,直接关系到基因免疫的成功与否.
目的:比較不同載體和不同大小的目的基因片段對戊型肝炎病毒(HEV)基因免疫抗原錶達的影響,為基于HEV中和抗原錶位的HEV基因免疫提供一定的依據.方法:將含Ⅳ型HEV中國株中和抗原錶位的p166和p179片段編碼基因分彆剋隆入pTR421和pCDNA3.1兩種真覈錶達載體,用脂質體介導基因轉染HepG2人肝癌細胞繫,經間接免疫熒光和Western blot分析以及將質粒註射小鼠跼部肌肉組織後經免疫組織化學染色檢測,分析目的基因在體內外的錶達水平.結果:成功構建瞭pTR421-166、pTR421-179、pCDNA3.1-166和pCDNA3.1-179四種重組質粒,經限製性內切酶雙酶切和覈苷痠測序鑒定,編碼基因正確無誤;pTR421-179轉染的細胞以及註射小鼠的跼部肌肉組織可以檢測到p179的錶達,而pCDNA3.1-179、pCDNA3.1-166以及pTR421-166均檢測不到目的基因在體內、外的抗原錶達.結論:載體和目的基因片段的選擇顯著影響HEV抗原在體內、外的錶達,直接關繫到基因免疫的成功與否.
목적:비교불동재체화불동대소적목적기인편단대무형간염병독(HEV)기인면역항원표체적영향,위기우HEV중화항원표위적HEV기인면역제공일정적의거.방법:장함Ⅳ형HEV중국주중화항원표위적p166화p179편단편마기인분별극륭입pTR421화pCDNA3.1량충진핵표체재체,용지질체개도기인전염HepG2인간암세포계,경간접면역형광화Western blot분석이급장질립주사소서국부기육조직후경면역조직화학염색검측,분석목적기인재체내외적표체수평.결과:성공구건료pTR421-166、pTR421-179、pCDNA3.1-166화pCDNA3.1-179사충중조질립,경한제성내절매쌍매절화핵감산측서감정,편마기인정학무오;pTR421-179전염적세포이급주사소서적국부기육조직가이검측도p179적표체,이pCDNA3.1-179、pCDNA3.1-166이급pTR421-166균검측불도목적기인재체내、외적항원표체.결론:재체화목적기인편단적선택현저영향HEV항원재체내、외적표체,직접관계도기인면역적성공여부.
