第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2006年
21期
2130-2134
,共5页
曾建明%冯文莉%王小中%赵世巧%白卫君%罗云萍%温健萍%涂植光%黄宗干
曾建明%馮文莉%王小中%趙世巧%白衛君%囉雲萍%溫健萍%塗植光%黃宗榦
증건명%풍문리%왕소중%조세교%백위군%라운평%온건평%도식광%황종간
慢性粒细胞白血病%PKR%反义RNA%逆转录病毒载体%基因克隆
慢性粒細胞白血病%PKR%反義RNA%逆轉錄病毒載體%基因剋隆
만성립세포백혈병%PKR%반의RNA%역전록병독재체%기인극륭
目的 构建针对慢性粒细胞白血病bcr-abl b3a2型mRNA的双表达逆转录病毒载体,初步探讨其对K562细胞表型的影响.方法 以逆转录病毒载体pMSCV-neo为骨架,构建eGFP及针对bcr-abl b3a2型mRNA的反义RNA双表达载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40AS,同时构建对照载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40S和pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL80AS,酶切及测序鉴定各重组载体;以脂质体法转染各载体到PT67包装细胞后,G418筛选稳定的病毒产生细胞株,再以NIH3T3细胞测定病毒滴度并感染K562细胞,计数细胞数绘制细胞生长曲线,FCM检测细胞凋亡情况、并用Western blot检测PKR激活情况.结果 酶切及测序结果证实各重组载体构建完全正确;G418筛选到高滴度重组逆转录病毒生产细胞株:PT67-MSCV/GFP、PT67-40as、PT67-40s和PT67-80as,且PT67-40as上清感染组K562细胞生长受抑制,其24 h时早期细胞凋亡率为22.54±3.19%,与除PT67-80as组外的其余各组相比有显著差异(P＜0.05);PT67-40as和PT67-80as处理组细胞PKR磷酸化水平分别增高了59.20%和60.33%,2AP能抑制PT67-40as的作用.结论 成功构建重组逆转录病毒双表达载体,并发现其能抑制K562细胞生长并引起细胞凋亡,通过激活PKR抗肿瘤可望成为肿瘤新的靶向治疗策略.
目的 構建針對慢性粒細胞白血病bcr-abl b3a2型mRNA的雙錶達逆轉錄病毒載體,初步探討其對K562細胞錶型的影響.方法 以逆轉錄病毒載體pMSCV-neo為骨架,構建eGFP及針對bcr-abl b3a2型mRNA的反義RNA雙錶達載體pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40AS,同時構建對照載體pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40S和pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL80AS,酶切及測序鑒定各重組載體;以脂質體法轉染各載體到PT67包裝細胞後,G418篩選穩定的病毒產生細胞株,再以NIH3T3細胞測定病毒滴度併感染K562細胞,計數細胞數繪製細胞生長麯線,FCM檢測細胞凋亡情況、併用Western blot檢測PKR激活情況.結果 酶切及測序結果證實各重組載體構建完全正確;G418篩選到高滴度重組逆轉錄病毒生產細胞株:PT67-MSCV/GFP、PT67-40as、PT67-40s和PT67-80as,且PT67-40as上清感染組K562細胞生長受抑製,其24 h時早期細胞凋亡率為22.54±3.19%,與除PT67-80as組外的其餘各組相比有顯著差異(P＜0.05);PT67-40as和PT67-80as處理組細胞PKR燐痠化水平分彆增高瞭59.20%和60.33%,2AP能抑製PT67-40as的作用.結論 成功構建重組逆轉錄病毒雙錶達載體,併髮現其能抑製K562細胞生長併引起細胞凋亡,通過激活PKR抗腫瘤可望成為腫瘤新的靶嚮治療策略.
목적 구건침대만성립세포백혈병bcr-abl b3a2형mRNA적쌍표체역전록병독재체,초보탐토기대K562세포표형적영향.방법 이역전록병독재체pMSCV-neo위골가,구건eGFP급침대bcr-abl b3a2형mRNA적반의RNA쌍표체재체pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40AS,동시구건대조재체pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40S화pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL80AS,매절급측서감정각중조재체;이지질체법전염각재체도PT67포장세포후,G418사선은정적병독산생세포주,재이NIH3T3세포측정병독적도병감염K562세포,계수세포수회제세포생장곡선,FCM검측세포조망정황、병용Western blot검측PKR격활정황.결과 매절급측서결과증실각중조재체구건완전정학;G418사선도고적도중조역전록병독생산세포주:PT67-MSCV/GFP、PT67-40as、PT67-40s화PT67-80as,차PT67-40as상청감염조K562세포생장수억제,기24 h시조기세포조망솔위22.54±3.19%,여제PT67-80as조외적기여각조상비유현저차이(P＜0.05);PT67-40as화PT67-80as처리조세포PKR린산화수평분별증고료59.20%화60.33%,2AP능억제PT67-40as적작용.결론 성공구건중조역전록병독쌍표체재체,병발현기능억제K562세포생장병인기세포조망,통과격활PKR항종류가망성위종류신적파향치료책략.
