CAJ | 학술논문

本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(imatinib)和p15基因克隆联合作用对K562细胞的增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用.用RT-PCR扩增p15基因,胶纯化回收后连接到T载体测序,确认序列正确后构建p15-pcDNA3.1载体,将p15-pcDNA3.1与空载体分别以脂质体转染入p15基因突变的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株;用Western blot检测转染后P15蛋白的表达;用MTT法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡.结果表明:从对照K562细胞中扩增的DNA片段,在第174-180位点有7个碱基缺失,这证实对照K562细胞中p15基因部位基因缺失.表达外源性P15蛋白的p15-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株;流式细胞术显示G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少;p15-pcDNA3.1-K562细胞与伊马替尼联合应用后凋亡细胞比例明显上升,MTT法显示细胞存活率较对照细胞明显下降.结论:表达外源P15蛋白联合应用伊马替尼对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用.
본연구탐토락안산격매억제제이마체니(imatinib)화p15기인극륭연합작용대K562세포적증식、세포주기급조망등적조공작용.용RT-PCR확증p15기인,효순화회수후련접도T재체측서,학인서렬정학후구건p15-pcDNA3.1재체,장p15-pcDNA3.1여공재체분별이지질체전염입p15기인돌변적K562세포,경사선득도G418항성적K562세포주;용Western blot검측전염후P15단백적표체;용MTT법측정세포존활솔;류식세포술검측세포주기화조망.결과표명:종대조K562세포중확증적DNA편단,재제174-180위점유7개감기결실,저증실대조K562세포중p15기인부위기인결실.표체외원성P15단백적p15-pcDNA3.1-K562세포주생장속도명현만우대조K562세포주;류식세포술현시G0/G1기세포증다,S기세포명현감소;p15-pcDNA3.1-K562세포여이마체니연합응용후조망세포비례명현상승,MTT법현시세포존활솔교대조세포명현하강.결론:표체외원P15단백연합응용이마체니대억제K562세포증식급촉조망방면구유협동작용.