华中医学杂志
華中醫學雜誌
화중의학잡지
CENTRAL CHINA MEDICAL JOURNAL
2007年
6期
467-469
,共3页
硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ%酵母双杂交系统%诱饵质粒
硫氧還蛋白過氧化物酶Ⅱ%酵母雙雜交繫統%誘餌質粒
류양환단백과양화물매Ⅱ%효모쌍잡교계통%유이질립
目的 构建硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ(PrxⅡ)诱饵质粒,同时检测其在酵母菌内的表达和对酵母细胞的毒性.方法 提取人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8细胞的RNA,利用RT-PCR获得其cDNA, PCR方法扩增PrxⅡ基因片段,纯化后以内切酶双酶切PrxⅡ和酵母表达载体pGBKT7,回收产物并连接,重组质粒命名为pGBKT7-PrxⅡ, 将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用.结果 构建的诱饵载体pGBKT7-PrxⅡ测序结果表明序列完全正确,融合区域的读码框正确.将pGBKT7-PrxⅡ成功转化入酵母感受态AH109,并证明PrxⅡ蛋白对酵母无毒性作用.结论 证实了PrxⅡ蛋白无酵母毒性,诱饵质粒pGBKT7-PrxⅡ可以用于酵母双杂交研究前列腺癌发病机制.
目的 構建硫氧還蛋白過氧化物酶Ⅱ(PrxⅡ)誘餌質粒,同時檢測其在酵母菌內的錶達和對酵母細胞的毒性.方法 提取人前列腺癌細胞繫PC-3M-1E8細胞的RNA,利用RT-PCR穫得其cDNA, PCR方法擴增PrxⅡ基因片段,純化後以內切酶雙酶切PrxⅡ和酵母錶達載體pGBKT7,迴收產物併連接,重組質粒命名為pGBKT7-PrxⅡ, 將重組質粒導入酵母菌AH109,檢測其錶達產物對酵母細胞有無毒性作用.結果 構建的誘餌載體pGBKT7-PrxⅡ測序結果錶明序列完全正確,融閤區域的讀碼框正確.將pGBKT7-PrxⅡ成功轉化入酵母感受態AH109,併證明PrxⅡ蛋白對酵母無毒性作用.結論 證實瞭PrxⅡ蛋白無酵母毒性,誘餌質粒pGBKT7-PrxⅡ可以用于酵母雙雜交研究前列腺癌髮病機製.
목적 구건류양환단백과양화물매Ⅱ(PrxⅡ)유이질립,동시검측기재효모균내적표체화대효모세포적독성.방법 제취인전렬선암세포계PC-3M-1E8세포적RNA,이용RT-PCR획득기cDNA, PCR방법확증PrxⅡ기인편단,순화후이내절매쌍매절PrxⅡ화효모표체재체pGBKT7,회수산물병련접,중조질립명명위pGBKT7-PrxⅡ, 장중조질립도입효모균AH109,검측기표체산물대효모세포유무독성작용.결과 구건적유이재체pGBKT7-PrxⅡ측서결과표명서렬완전정학,융합구역적독마광정학.장pGBKT7-PrxⅡ성공전화입효모감수태AH109,병증명PrxⅡ단백대효모무독성작용.결론 증실료PrxⅡ단백무효모독성,유이질립pGBKT7-PrxⅡ가이용우효모쌍잡교연구전렬선암발병궤제.
