CAJ | 학술논문

根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp、430 bp和1 015 bp目的片段.以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR.CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性.以β-actin为对照,利用本方法检测了174份临床样品(血清、肺脏和胎儿),其结果为:PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为30.4%、4.6%和1.7%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为1.7%.同时对临床样品中CSFV、JEV和PRRSV阳性PCR产物进行测序分析,发现CSFV、PRRSV和JEV的PCR产物序列和NCBI数据库中目标基因的同源性分别为92%、90%和89%,这证实了多重PCR的阳性结果为上述3种病毒.结果证明,所建立的多重RT-PCR可用于临床检测.
근거저온병독(CSFV)적E2기인보수서렬、저번식여호흡장애종합정병독(PRRSV)적ORF7기인급부분ORF6화3-UTR기인서렬화저을형뇌염병독(JEV)적E기인보수서렬,설계료3대인물,확증대소분별위288 bp、430 bp화1 015 bp목적편단.이순배양병독추제RNA,제비cDNA모판,이용3대인물,통과조건적우화,건립료동시검측저3충병독적다중RT-PCR.CSFV、PRRSV화JEV적RNA최소검출량분별위0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,기타적RNA병독여TGEV이급DNA병독여PPV、PrV、PCV-2검측결과위음성.이β-actin위대조,이용본방법검측료174빈림상양품(혈청、폐장화태인),기결과위:PRRSV、CSFV화JEV적양성솔분별위30.4%、4.6%화1.7%;CSFV화PRRSV혼합감염양성솔위1.7%.동시대림상양품중CSFV、JEV화PRRSV양성PCR산물진행측서분석,발현CSFV、PRRSV화JEV적PCR산물서렬화NCBI수거고중목표기인적동원성분별위92%、90%화89%,저증실료다중PCR적양성결과위상술3충병독.결과증명,소건립적다중RT-PCR가용우림상검측.