动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2009年
1期
17-22
,共6页
周庆丰%刘忠华%龚朋飞%周美华%苏润环%何津佳%毕英佐
週慶豐%劉忠華%龔朋飛%週美華%囌潤環%何津佳%畢英佐
주경봉%류충화%공붕비%주미화%소윤배%하진가%필영좌
猪白细胞介素2%基因克隆%腺病毒载体%基因表达
豬白細胞介素2%基因剋隆%腺病毒載體%基因錶達
저백세포개소2%기인극륭%선병독재체%기인표체
根据GenBank中收录的猪白细胞介素2(pIL-2)基因序列,设计1对特异性引物.运用RT-PCR技术从刀豆素(Con A)诱导的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到pIL-2基因,并将其克隆至pGEM-T Easy栽体上.核苷酸测序结果显示,获得的基因序列全长493 bp,含465 bp的开放阅读框,编码154个氨基酸,与已知pIL-2核苷酸序列和氨基酸序列的同源性都高达100%.将克隆的pIL-2基因编码阅读框亚克隆至腺病毒穿梭栽体pShuttle-CMV,电转化含腺病毒基因组(pAdEasy-1)的大肠埃希茵细胞BJ5183-AD-1,成功获得了重组腺病毒DNA,将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD-293细胞,经过病毒基因组的PCR鉴定和转录水平的RT-PCR鉴定,初步表明,获得了表达pIL-2的重组腺病毒.
根據GenBank中收錄的豬白細胞介素2(pIL-2)基因序列,設計1對特異性引物.運用RT-PCR技術從刀豆素(Con A)誘導的豬外週血淋巴細胞總RNA中擴增得到pIL-2基因,併將其剋隆至pGEM-T Easy栽體上.覈苷痠測序結果顯示,穫得的基因序列全長493 bp,含465 bp的開放閱讀框,編碼154箇氨基痠,與已知pIL-2覈苷痠序列和氨基痠序列的同源性都高達100%.將剋隆的pIL-2基因編碼閱讀框亞剋隆至腺病毒穿梭栽體pShuttle-CMV,電轉化含腺病毒基因組(pAdEasy-1)的大腸埃希茵細胞BJ5183-AD-1,成功穫得瞭重組腺病毒DNA,將純化後的重組腺病毒DNA轉染AD-293細胞,經過病毒基因組的PCR鑒定和轉錄水平的RT-PCR鑒定,初步錶明,穫得瞭錶達pIL-2的重組腺病毒.
근거GenBank중수록적저백세포개소2(pIL-2)기인서렬,설계1대특이성인물.운용RT-PCR기술종도두소(Con A)유도적저외주혈림파세포총RNA중확증득도pIL-2기인,병장기극륭지pGEM-T Easy재체상.핵감산측서결과현시,획득적기인서렬전장493 bp,함465 bp적개방열독광,편마154개안기산,여이지pIL-2핵감산서렬화안기산서렬적동원성도고체100%.장극륭적pIL-2기인편마열독광아극륭지선병독천사재체pShuttle-CMV,전전화함선병독기인조(pAdEasy-1)적대장애희인세포BJ5183-AD-1,성공획득료중조선병독DNA,장순화후적중조선병독DNA전염AD-293세포,경과병독기인조적PCR감정화전록수평적RT-PCR감정,초보표명,획득료표체pIL-2적중조선병독.
