中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2009年
2期
324-330
,共7页
王蕾%李艳%王萍萍%卢香兰%王柏勋
王蕾%李豔%王萍萍%盧香蘭%王柏勛
왕뢰%리염%왕평평%로향란%왕백훈
P27Kipl%TGF-β1%急性早幼粒细胞白血病%细胞凋亡%Cyclin E%三氧化二砷
P27Kipl%TGF-β1%急性早幼粒細胞白血病%細胞凋亡%Cyclin E%三氧化二砷
P27Kipl%TGF-β1%급성조유립세포백혈병%세포조망%Cyclin E%삼양화이신
本研究探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对原代APL细胞凋亡及周期的影响,As2O2作用前后P27Kipl、TGF-β1、cyelin E和bcl-2的变化以及P27Kipl>在As2O3诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡中的作用.用细胞形态学及流式细胞仪分别检测原代APL细胞凋亡和细胞周期改变,免疫组织化学法和RT-PCR技术检测药物处理前后细胞P27Kipl、TGF-β1、cyclin E以及BCL-2蛋白和基因表达的变化.结果表明:As2O3与APL细胞共同培养24小时,浓度为1、5、10 μmol/L时,凋亡细胞所占比例分别为1.42%、4.57%、10.67%;至48小时,凋亡细胞分别为8.92%、16.07%和18.90%,明显高于相同浓度的As2O3作用24小时(P<0.05);至72小时,细胞以碎片为主.同一时段随着As2O3浓度的增加,APL细胞凋亡不断增多;同一浓度As2O3作用于APL细胞,随着作用时间的延长,APL细胞凋亡也随之增多.5、10 μmol/L的As2O3作用于APL细胞24、48、72小时可见细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例均明显高于对照组(P<0.05),而1 μmol/L As2O3作用后的细胞周期无明显变化.1、5和10 μmol/LAs2O3作用于APL细胞.P27Kipl蛋白表达增高,P27KiplmRNA与β-actin灰度值之比(P27Kipl/β-actin)分别为0.181、0.489和0.921,表明随着As2O3浓度的增高,P27KiplmRNA表达水平显著上调(P<0.05),P27Kipl表达与凋亡细胞数之间存在正相关(r=0.55,P<0.05);与对照组相比,TGF-β1蛋白和mRNA表达上调,伴有Cyclin E、BCL-2蛋白和mRNA表达下调,TGF-β1表达与凋亡细胞数之间存在正相关(r=0.51,P<0.05),TGF-β1表达与P27Kipl表达之间也存在正相关(r=0.31,P<0.05).结论:As2O3体外可诱导原代APL细胞凋亡,存在时间-剂量依赖关系,并使细胞周期阻滞于G1期.P27Kipl表达的变化情况与As2O3诱导细胞凋亡的作用效果密切相关,As2O3诱导原代APL细胞凋亡的机制可能是通过上调TGF-β1,从而上调P27Kipl,拮抗Cyclin E和BCL-2的作用,抑制细胞增殖,使细胞周期阻滞于G1期,从而诱导细胞发生凋亡.
本研究探討三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)對原代APL細胞凋亡及週期的影響,As2O2作用前後P27Kipl、TGF-β1、cyelin E和bcl-2的變化以及P27Kipl>在As2O3誘導急性早幼粒細胞白血病細胞凋亡中的作用.用細胞形態學及流式細胞儀分彆檢測原代APL細胞凋亡和細胞週期改變,免疫組織化學法和RT-PCR技術檢測藥物處理前後細胞P27Kipl、TGF-β1、cyclin E以及BCL-2蛋白和基因錶達的變化.結果錶明:As2O3與APL細胞共同培養24小時,濃度為1、5、10 μmol/L時,凋亡細胞所佔比例分彆為1.42%、4.57%、10.67%;至48小時,凋亡細胞分彆為8.92%、16.07%和18.90%,明顯高于相同濃度的As2O3作用24小時(P<0.05);至72小時,細胞以碎片為主.同一時段隨著As2O3濃度的增加,APL細胞凋亡不斷增多;同一濃度As2O3作用于APL細胞,隨著作用時間的延長,APL細胞凋亡也隨之增多.5、10 μmol/L的As2O3作用于APL細胞24、48、72小時可見細胞週期阻滯于G1期,G1期細胞比例均明顯高于對照組(P<0.05),而1 μmol/L As2O3作用後的細胞週期無明顯變化.1、5和10 μmol/LAs2O3作用于APL細胞.P27Kipl蛋白錶達增高,P27KiplmRNA與β-actin灰度值之比(P27Kipl/β-actin)分彆為0.181、0.489和0.921,錶明隨著As2O3濃度的增高,P27KiplmRNA錶達水平顯著上調(P<0.05),P27Kipl錶達與凋亡細胞數之間存在正相關(r=0.55,P<0.05);與對照組相比,TGF-β1蛋白和mRNA錶達上調,伴有Cyclin E、BCL-2蛋白和mRNA錶達下調,TGF-β1錶達與凋亡細胞數之間存在正相關(r=0.51,P<0.05),TGF-β1錶達與P27Kipl錶達之間也存在正相關(r=0.31,P<0.05).結論:As2O3體外可誘導原代APL細胞凋亡,存在時間-劑量依賴關繫,併使細胞週期阻滯于G1期.P27Kipl錶達的變化情況與As2O3誘導細胞凋亡的作用效果密切相關,As2O3誘導原代APL細胞凋亡的機製可能是通過上調TGF-β1,從而上調P27Kipl,拮抗Cyclin E和BCL-2的作用,抑製細胞增殖,使細胞週期阻滯于G1期,從而誘導細胞髮生凋亡.
본연구탐토삼양화이신(arsenic trioxide,As2O3)대원대APL세포조망급주기적영향,As2O2작용전후P27Kipl、TGF-β1、cyelin E화bcl-2적변화이급P27Kipl>재As2O3유도급성조유립세포백혈병세포조망중적작용.용세포형태학급류식세포의분별검측원대APL세포조망화세포주기개변,면역조직화학법화RT-PCR기술검측약물처리전후세포P27Kipl、TGF-β1、cyclin E이급BCL-2단백화기인표체적변화.결과표명:As2O3여APL세포공동배양24소시,농도위1、5、10 μmol/L시,조망세포소점비례분별위1.42%、4.57%、10.67%;지48소시,조망세포분별위8.92%、16.07%화18.90%,명현고우상동농도적As2O3작용24소시(P<0.05);지72소시,세포이쇄편위주.동일시단수착As2O3농도적증가,APL세포조망불단증다;동일농도As2O3작용우APL세포,수착작용시간적연장,APL세포조망야수지증다.5、10 μmol/L적As2O3작용우APL세포24、48、72소시가견세포주기조체우G1기,G1기세포비례균명현고우대조조(P<0.05),이1 μmol/L As2O3작용후적세포주기무명현변화.1、5화10 μmol/LAs2O3작용우APL세포.P27Kipl단백표체증고,P27KiplmRNA여β-actin회도치지비(P27Kipl/β-actin)분별위0.181、0.489화0.921,표명수착As2O3농도적증고,P27KiplmRNA표체수평현저상조(P<0.05),P27Kipl표체여조망세포수지간존재정상관(r=0.55,P<0.05);여대조조상비,TGF-β1단백화mRNA표체상조,반유Cyclin E、BCL-2단백화mRNA표체하조,TGF-β1표체여조망세포수지간존재정상관(r=0.51,P<0.05),TGF-β1표체여P27Kipl표체지간야존재정상관(r=0.31,P<0.05).결론:As2O3체외가유도원대APL세포조망,존재시간-제량의뢰관계,병사세포주기조체우G1기.P27Kipl표체적변화정황여As2O3유도세포조망적작용효과밀절상관,As2O3유도원대APL세포조망적궤제가능시통과상조TGF-β1,종이상조P27Kipl,길항Cyclin E화BCL-2적작용,억제세포증식,사세포주기조체우G1기,종이유도세포발생조망.
