CAJ | 학술논문

为实现家兔BMP7基因原核表达及探索适宜的表达条件,采用PCR技术从pMD18-T-BMP7重组质粒中扩增获得BMP7基因成熟肽片段(mBMP7),构建原核表达工程茵pET32a-mBMP7/BL21(DE3)和pET32a-mBMP7/BL21(DE3)pLysS,并比较温度、IPTG浓度、诱导时间等因素对目的蛋白表达的影响.结果表明,mBMP7原核表达栽体构建正确;工程茵pET32a-mBMP7/BL21(DE3)和pET32a-mBMP7/BL21(DE3)pLysS经IPTG诱导均可表达含有家兔BMP7成熟肽的34KDa的融合蛋白,表达产物约占茵体总蛋白的30%.在37℃、0.75 mM IPTG以及诱导150 min时,能取得较高的目的蛋白表达量;在20℃低温条件下,IPTG浓度和诱导表达时间应分别以0.20mM和7 h为宜;另外,目的蛋白表达对工程茵生长无明显的不利影响.因此,成功地构建了家兔BMP7基因工程茵,并确定了适宜的表达条件,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定基础.
위실현가토BMP7기인원핵표체급탐색괄의적표체조건,채용PCR기술종pMD18-T-BMP7중조질립중확증획득BMP7기인성숙태편단(mBMP7),구건원핵표체공정인pET32a-mBMP7/BL21(DE3)화pET32a-mBMP7/BL21(DE3)pLysS,병비교온도、IPTG농도、유도시간등인소대목적단백표체적영향.결과표명,mBMP7원핵표체재체구건정학;공정인pET32a-mBMP7/BL21(DE3)화pET32a-mBMP7/BL21(DE3)pLysS경IPTG유도균가표체함유가토BMP7성숙태적34KDa적융합단백,표체산물약점인체총단백적30%.재37℃、0.75 mM IPTG이급유도150 min시,능취득교고적목적단백표체량;재20℃저온조건하,IPTG농도화유도표체시간응분별이0.20mM화7 h위의;령외,목적단백표체대공정인생장무명현적불리영향.인차,성공지구건료가토BMP7기인공정인,병학정료괄의적표체조건,위진일보연구해단백적결구화공능전정기출.