中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
1期
56-60
,共5页
夏卫%郁心%姜健%田丽娜%陈瑶%缪竞诚
夏衛%鬱心%薑健%田麗娜%陳瑤%繆競誠
하위%욱심%강건%전려나%진요%무경성
人白血病抑制因子%饲养层%CD34+细胞%体外扩增%造血干/祖细胞
人白血病抑製因子%飼養層%CD34+細胞%體外擴增%造血榦/祖細胞
인백혈병억제인자%사양층%CD34+세포%체외확증%조혈간/조세포
背景:单份脐血的造血细胞数量有限,难以满足成人的需要,如何有效地扩增脐血造血干/祖细胞是目前研究的热点.目的:构建人白血病抑制因子基因修饰的人胚肺成纤维细胞,观察转基因细胞对脐血CD34+造血干/祖细胞体外扩增的影响.方法:建立转人白血病抑制因子基因的饲养层细胞,用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因的表达;采用免疫磁珠法分离脐血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,流式细胞术检测各组增殖效果;扩增后的造血干/祖细胞用跨膜迁移实验检测自发迁移率和基质细胞衍生因子1诱导迁移试验以鉴定体外扩增的造血干/祖细胞的归巢能力.结果与结论:成功建立转基因饲养层细胞,RT-PCR法和ELISA法证实有目的基因表达,与人白血病抑制因子转基因饲养层细胞共培养7 d后CD34+造血干/祖细胞可大量扩增,同时表面黏附分子的表达量仍较高.体外迁移实验显示与转基因饲养层细胞共培养的造血细胞的诱导迁移率明显高于对照组,可以较好地保持其归巢能力.因此转人白血病抑制因子基因的饲养层细胞可有效扩增脐血CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力.
揹景:單份臍血的造血細胞數量有限,難以滿足成人的需要,如何有效地擴增臍血造血榦/祖細胞是目前研究的熱點.目的:構建人白血病抑製因子基因脩飾的人胚肺成纖維細胞,觀察轉基因細胞對臍血CD34+造血榦/祖細胞體外擴增的影響.方法:建立轉人白血病抑製因子基因的飼養層細胞,用RT-PCR法和ELISA法鑒定目的基因的錶達;採用免疫磁珠法分離臍血CD34+造血榦/祖細胞,流式細胞術檢測純度;將CD34+造血榦/祖細胞與飼養層細胞共培養,流式細胞術檢測各組增殖效果;擴增後的造血榦/祖細胞用跨膜遷移實驗檢測自髮遷移率和基質細胞衍生因子1誘導遷移試驗以鑒定體外擴增的造血榦/祖細胞的歸巢能力.結果與結論:成功建立轉基因飼養層細胞,RT-PCR法和ELISA法證實有目的基因錶達,與人白血病抑製因子轉基因飼養層細胞共培養7 d後CD34+造血榦/祖細胞可大量擴增,同時錶麵黏附分子的錶達量仍較高.體外遷移實驗顯示與轉基因飼養層細胞共培養的造血細胞的誘導遷移率明顯高于對照組,可以較好地保持其歸巢能力.因此轉人白血病抑製因子基因的飼養層細胞可有效擴增臍血CD34+造血榦/祖細胞,延緩其分化,併且體外擴增後仍保持較高的歸巢能力.
배경:단빈제혈적조혈세포수량유한,난이만족성인적수요,여하유효지확증제혈조혈간/조세포시목전연구적열점.목적:구건인백혈병억제인자기인수식적인배폐성섬유세포,관찰전기인세포대제혈CD34+조혈간/조세포체외확증적영향.방법:건립전인백혈병억제인자기인적사양층세포,용RT-PCR법화ELISA법감정목적기인적표체;채용면역자주법분리제혈CD34+조혈간/조세포,류식세포술검측순도;장CD34+조혈간/조세포여사양층세포공배양,류식세포술검측각조증식효과;확증후적조혈간/조세포용과막천이실험검측자발천이솔화기질세포연생인자1유도천이시험이감정체외확증적조혈간/조세포적귀소능력.결과여결론:성공건립전기인사양층세포,RT-PCR법화ELISA법증실유목적기인표체,여인백혈병억제인자전기인사양층세포공배양7 d후CD34+조혈간/조세포가대량확증,동시표면점부분자적표체량잉교고.체외천이실험현시여전기인사양층세포공배양적조혈세포적유도천이솔명현고우대조조,가이교호지보지기귀소능력.인차전인백혈병억제인자기인적사양층세포가유효확증제혈CD34+조혈간/조세포,연완기분화,병차체외확증후잉보지교고적귀소능력.
