广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2012年
8期
1097-1100
,共4页
马伟峰%胡厚稳%杨飞华%蔡绍晖
馬偉峰%鬍厚穩%楊飛華%蔡紹暉
마위봉%호후은%양비화%채소휘
基质细胞衍生因子%饰胶蛋白聚糖%腺病毒载体
基質細胞衍生因子%飾膠蛋白聚糖%腺病毒載體
기질세포연생인자%식효단백취당%선병독재체
目的 制备表达基质细胞衍生因子(SDF-1)拮抗剂P2G与饰胶蛋白聚糖(decorin,DCN)嵌合基因的重组腺病毒,并检测其在HEK-293细胞中的表达情况.方法 以前期构建的pET-30a+/P2G-DCN为模板,PCR扩增目的 基因P2G-DCN,并克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV;然后将化学合成的SDF-1信号肽序列插入P2G-DCN的5′端,构建为重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/SP-P2G-DCN;经PmeⅠ酶切线性化,与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAd-SP-P2G-DCN.PacⅠ酶切线性化的pAd-SP-P2G-DCN通过脂质体介导转染人胚肾转化细胞系HEK-293,包装并扩增重组腺病毒Ad-P2G-DCN.荧光计数确定病毒感染滴度,并以Western blot法检测嵌合蛋白P2G-DCN在HEK-293细胞中的表达情况.结果 构建了携带P2G-DCN基因的重组腺病毒,该重组腺病毒感染HEK-293细胞后可高效分泌表达重组嵌合蛋白P2G-DCN.结论 成功构建了重组腺病毒Ad-P2G-DCN,为后续系统研究Ad-P2G-DCN在肿瘤基因治疗中的作用奠定了实验基础.
目的 製備錶達基質細胞衍生因子(SDF-1)拮抗劑P2G與飾膠蛋白聚糖(decorin,DCN)嵌閤基因的重組腺病毒,併檢測其在HEK-293細胞中的錶達情況.方法 以前期構建的pET-30a+/P2G-DCN為模闆,PCR擴增目的 基因P2G-DCN,併剋隆到穿梭質粒pAdTrack-CMV;然後將化學閤成的SDF-1信號肽序列插入P2G-DCN的5′耑,構建為重組穿梭質粒pAdTrack-CMV/SP-P2G-DCN;經PmeⅠ酶切線性化,與骨架質粒pAdEasy-1在大腸桿菌BJ5183中進行同源重組,篩選重組腺病毒質粒pAd-SP-P2G-DCN.PacⅠ酶切線性化的pAd-SP-P2G-DCN通過脂質體介導轉染人胚腎轉化細胞繫HEK-293,包裝併擴增重組腺病毒Ad-P2G-DCN.熒光計數確定病毒感染滴度,併以Western blot法檢測嵌閤蛋白P2G-DCN在HEK-293細胞中的錶達情況.結果 構建瞭攜帶P2G-DCN基因的重組腺病毒,該重組腺病毒感染HEK-293細胞後可高效分泌錶達重組嵌閤蛋白P2G-DCN.結論 成功構建瞭重組腺病毒Ad-P2G-DCN,為後續繫統研究Ad-P2G-DCN在腫瘤基因治療中的作用奠定瞭實驗基礎.
목적 제비표체기질세포연생인자(SDF-1)길항제P2G여식효단백취당(decorin,DCN)감합기인적중조선병독,병검측기재HEK-293세포중적표체정황.방법 이전기구건적pET-30a+/P2G-DCN위모판,PCR확증목적 기인P2G-DCN,병극륭도천사질립pAdTrack-CMV;연후장화학합성적SDF-1신호태서렬삽입P2G-DCN적5′단,구건위중조천사질립pAdTrack-CMV/SP-P2G-DCN;경PmeⅠ매절선성화,여골가질립pAdEasy-1재대장간균BJ5183중진행동원중조,사선중조선병독질립pAd-SP-P2G-DCN.PacⅠ매절선성화적pAd-SP-P2G-DCN통과지질체개도전염인배신전화세포계HEK-293,포장병확증중조선병독Ad-P2G-DCN.형광계수학정병독감염적도,병이Western blot법검측감합단백P2G-DCN재HEK-293세포중적표체정황.결과 구건료휴대P2G-DCN기인적중조선병독,해중조선병독감염HEK-293세포후가고효분비표체중조감합단백P2G-DCN.결론 성공구건료중조선병독Ad-P2G-DCN,위후속계통연구Ad-P2G-DCN재종류기인치료중적작용전정료실험기출.
