中国肿瘤临床
中國腫瘤臨床
중국종류림상
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY
2012年
12期
817-821
,共5页
赵文晶%杨振丽%顾蓓%冯海凉%张敏%刘艳艳%李占稳%刘玉琴
趙文晶%楊振麗%顧蓓%馮海涼%張敏%劉豔豔%李佔穩%劉玉琴
조문정%양진려%고배%풍해량%장민%류염염%리점은%류옥금
树突状肉瘤细胞株%囊泡膜蛋白相关蛋白%增殖%侵袭%转移
樹突狀肉瘤細胞株%囊泡膜蛋白相關蛋白%增殖%侵襲%轉移
수돌상육류세포주%낭포막단백상관단백%증식%침습%전이
目的:探讨囊泡膜蛋白相关蛋白(VAP33)过表达对小鼠树突状肉瘤细胞DG6增殖及侵袭转移的影响.方法:反转录获得VAP33 cDNA,利用基因重组技术构建VAP33-GFP融合基因慢病毒表达载体(pWPXL-VAP33),在脂质体Lipofectamine 2000介导下与辅助质粒(PsPAX2、MD2G)共转染293T细胞包装生产重组慢病毒.取病毒上清感染内源性低表达VAP33的DG6细胞,通过荧光显微镜挑选、Western-blot鉴定获得VAP33稳定过表达的阳性单克隆细胞株(DG6-VAP33).MTT法检测细胞增殖情况,Transwell和集落形成检测肿瘤细胞体外侵袭、成瘤能力.同时建立小鼠皮下移植瘤模型,连续6周观察VAP33过表达对活体内肿瘤细胞生长、成瘤、转移能力的影响.结果:重组慢病毒表达载体pWPXL-VAP33构建成功,包装滴度达6×107IU/mL,感染DG6细胞后筛选到VAP33稳定过表达细胞株(DG6-VAP33).与DG6细胞相比,DG6-VAP33细胞体外增殖减慢,每孔集落数分别为(52±8)个和(36±5)个(P<0.05);Transwell方法观察到,DG6-VAP33细胞体外侵袭能力显著下降,穿膜细胞数(14±11)个少于DG6(36±17)个(P<0.01).通过6周的连续观察,DG6-VAP33组肿瘤生长速度显著慢于DG6组,成瘤率50%(5/10)、肺转移率(0)也明显降低(DG6组成瘤率100%、肺转移率80%).结论:VAP33过表达可抑制肿瘤细胞的增殖、成瘤及侵袭转移能力.
目的:探討囊泡膜蛋白相關蛋白(VAP33)過錶達對小鼠樹突狀肉瘤細胞DG6增殖及侵襲轉移的影響.方法:反轉錄穫得VAP33 cDNA,利用基因重組技術構建VAP33-GFP融閤基因慢病毒錶達載體(pWPXL-VAP33),在脂質體Lipofectamine 2000介導下與輔助質粒(PsPAX2、MD2G)共轉染293T細胞包裝生產重組慢病毒.取病毒上清感染內源性低錶達VAP33的DG6細胞,通過熒光顯微鏡挑選、Western-blot鑒定穫得VAP33穩定過錶達的暘性單剋隆細胞株(DG6-VAP33).MTT法檢測細胞增殖情況,Transwell和集落形成檢測腫瘤細胞體外侵襲、成瘤能力.同時建立小鼠皮下移植瘤模型,連續6週觀察VAP33過錶達對活體內腫瘤細胞生長、成瘤、轉移能力的影響.結果:重組慢病毒錶達載體pWPXL-VAP33構建成功,包裝滴度達6×107IU/mL,感染DG6細胞後篩選到VAP33穩定過錶達細胞株(DG6-VAP33).與DG6細胞相比,DG6-VAP33細胞體外增殖減慢,每孔集落數分彆為(52±8)箇和(36±5)箇(P<0.05);Transwell方法觀察到,DG6-VAP33細胞體外侵襲能力顯著下降,穿膜細胞數(14±11)箇少于DG6(36±17)箇(P<0.01).通過6週的連續觀察,DG6-VAP33組腫瘤生長速度顯著慢于DG6組,成瘤率50%(5/10)、肺轉移率(0)也明顯降低(DG6組成瘤率100%、肺轉移率80%).結論:VAP33過錶達可抑製腫瘤細胞的增殖、成瘤及侵襲轉移能力.
목적:탐토낭포막단백상관단백(VAP33)과표체대소서수돌상육류세포DG6증식급침습전이적영향.방법:반전록획득VAP33 cDNA,이용기인중조기술구건VAP33-GFP융합기인만병독표체재체(pWPXL-VAP33),재지질체Lipofectamine 2000개도하여보조질립(PsPAX2、MD2G)공전염293T세포포장생산중조만병독.취병독상청감염내원성저표체VAP33적DG6세포,통과형광현미경도선、Western-blot감정획득VAP33은정과표체적양성단극륭세포주(DG6-VAP33).MTT법검측세포증식정황,Transwell화집락형성검측종류세포체외침습、성류능력.동시건립소서피하이식류모형,련속6주관찰VAP33과표체대활체내종류세포생장、성류、전이능력적영향.결과:중조만병독표체재체pWPXL-VAP33구건성공,포장적도체6×107IU/mL,감염DG6세포후사선도VAP33은정과표체세포주(DG6-VAP33).여DG6세포상비,DG6-VAP33세포체외증식감만,매공집락수분별위(52±8)개화(36±5)개(P<0.05);Transwell방법관찰도,DG6-VAP33세포체외침습능력현저하강,천막세포수(14±11)개소우DG6(36±17)개(P<0.01).통과6주적련속관찰,DG6-VAP33조종류생장속도현저만우DG6조,성류솔50%(5/10)、폐전이솔(0)야명현강저(DG6조성류솔100%、폐전이솔80%).결론:VAP33과표체가억제종류세포적증식、성류급침습전이능력.
