微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2004年
1期
67-71
,共5页
何秀萍%郭雪娜%张博润%谭华荣
何秀萍%郭雪娜%張博潤%譚華榮
하수평%곽설나%장박윤%담화영
甾醇酰基转移酶%基因表达%麦角甾醇%酵母工程菌
甾醇酰基轉移酶%基因錶達%麥角甾醇%酵母工程菌
치순선기전이매%기인표체%맥각치순%효모공정균
通过PCR扩增克隆到含酵母菌甾醇酰基转移酶基因ARE2编码序列和上游调控序列的DNA片段ARE2-1及仅含编码序列的DNA片段ARE2-2.分别以ARE2启动子,乙醇脱氢酶基因ADH1启动子和铜抗性基因CUPI启动子及ADH1终止子为调控元件构建了酵母菌表达质粒pHX2,pHXA2和pHXC2.表达质粒分别转化酿酒酵母单倍体菌株YS58和以前通过细胞杂交构建的麦角甾醇高产菌株YEH56.通过营养缺陷互补和铜抗性筛选到转化子,质粒上的ARE2基因在YS58和YEH56中都实现了活性表达,使细胞内甾醇酯化水平升高,并导致细胞麦角甾醇含量的提高.对转化菌株的培养条件进行了初步研究,在优化条件下,重组转化菌株YEH56(pHX2)、YEH56(pHXA2)和YEH56(pHXC2)的麦角甾醇含量分别是受体菌YEH56的1.3、1.3和1.4倍.
通過PCR擴增剋隆到含酵母菌甾醇酰基轉移酶基因ARE2編碼序列和上遊調控序列的DNA片段ARE2-1及僅含編碼序列的DNA片段ARE2-2.分彆以ARE2啟動子,乙醇脫氫酶基因ADH1啟動子和銅抗性基因CUPI啟動子及ADH1終止子為調控元件構建瞭酵母菌錶達質粒pHX2,pHXA2和pHXC2.錶達質粒分彆轉化釀酒酵母單倍體菌株YS58和以前通過細胞雜交構建的麥角甾醇高產菌株YEH56.通過營養缺陷互補和銅抗性篩選到轉化子,質粒上的ARE2基因在YS58和YEH56中都實現瞭活性錶達,使細胞內甾醇酯化水平升高,併導緻細胞麥角甾醇含量的提高.對轉化菌株的培養條件進行瞭初步研究,在優化條件下,重組轉化菌株YEH56(pHX2)、YEH56(pHXA2)和YEH56(pHXC2)的麥角甾醇含量分彆是受體菌YEH56的1.3、1.3和1.4倍.
통과PCR확증극륭도함효모균치순선기전이매기인ARE2편마서렬화상유조공서렬적DNA편단ARE2-1급부함편마서렬적DNA편단ARE2-2.분별이ARE2계동자,을순탈경매기인ADH1계동자화동항성기인CUPI계동자급ADH1종지자위조공원건구건료효모균표체질립pHX2,pHXA2화pHXC2.표체질립분별전화양주효모단배체균주YS58화이전통과세포잡교구건적맥각치순고산균주YEH56.통과영양결함호보화동항성사선도전화자,질립상적ARE2기인재YS58화YEH56중도실현료활성표체,사세포내치순지화수평승고,병도치세포맥각치순함량적제고.대전화균주적배양조건진행료초보연구,재우화조건하,중조전화균주YEH56(pHX2)、YEH56(pHXA2)화YEH56(pHXC2)적맥각치순함량분별시수체균YEH56적1.3、1.3화1.4배.
