CAJ | 학술논문

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毛冠鹿睾丸组织cDNA文库的构建及P1精蛋白基因的克隆
모관록고환조직cDNA문고적구건급P1정단백기인적극륭
Construction of cDNA library from testis of Elaphodus cephalophus and cloning of P1 protamine gene

万方数据

兽类学报獸類學報 수류학보
ACTA THERIOLOGICA SINICA
2006年 2期 164-170 ,共7页

张文%汤文文%庞宏%曹祥荣%戴君勇%张锡然%徐春茂%王强%胡均

장문%탕문문%방굉%조상영%대군용%장석연%서춘무%왕강%호균

毛冠鹿%睾丸%cDNA文库%P1精蛋白毛冠鹿%睪汍%cDNA文庫%P1精蛋白
모관록%고환%cDNA문고%P1정단백

为构建毛冠鹿睾丸组织cDNA文库,用TRIzol试剂提取总RNA,利用SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术合成cDNA第1链,双链cDNA经LD-PCR(Long-distance PCR)扩增并经sfiⅠ酶切和过柱分级分离后,克隆入经sfi Ⅰ酶切的λTripiEX2载体,经体外包装而成cDNA原始文库.该毛冠鹿睾丸组织cDNA原始文库含有独立克隆数为5.52×105,重组率达90.8%.文库扩增后,滴度达1.05×109 pfu/ml,插入cDNA平均长度为1.01kb.通过随机挑取噬菌斑,并克隆测序,从该文库中克隆了毛冠鹿睾丸组织特异表达基因:P1精蛋白基因(GenBank序列号:DQ299383),该cDNA具有5'和3'非编码区,从第95至250个核苷酸为一完整阅读框(ORF),此阅读框编码一个51 Aa的P1精蛋白.以上结果表明本文构建的毛冠鹿睾丸组织cD-NA文库符合建库要求,可作为进一步克隆毛冠鹿睾丸组织特异表达基因的可靠材料.
위구건모관록고환조직cDNA문고,용TRIzol시제제취총RNA,이용SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)기술합성cDNA제1련,쌍련cDNA경LD-PCR(Long-distance PCR)확증병경sfiⅠ매절화과주분급분리후,극륭입경sfi Ⅰ매절적λTripiEX2재체,경체외포장이성cDNA원시문고.해모관록고환조직cDNA원시문고함유독립극륭수위5.52×105,중조솔체90.8%.문고확증후,적도체1.05×109 pfu/ml,삽입cDNA평균장도위1.01kb.통과수궤도취서균반,병극륭측서,종해문고중극륭료모관록고환조직특이표체기인:P1정단백기인(GenBank서렬호:DQ299383),해cDNA구유5'화3'비편마구,종제95지250개핵감산위일완정열독광(ORF),차열독광편마일개51 Aa적P1정단백.이상결과표명본문구건적모관록고환조직cD-NA문고부합건고요구,가작위진일보극륭모관록고환조직특이표체기인적가고재료.