CAJ | 학술논문

根据GenBank报道的鸡新城疫病毒F基因序列设计了一对引物,以鸡新城疫病毒HeB02分离株基因组为模板,通过RT-PCR扩增出了1.66kb左右的F基因片段,序列分析表明HeB02株F基因与国内标准强毒株F48 E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30的F基因核苷酸序列的同源性分别为88.1%、84.9%和83.8%.将HeB02株F基因插入真核表达载体pVAX1中,构建了真核表达质粒pSV-F,通过脂质体转染COS-7细胞,SDS-PAGE分析可见表达的特异蛋白条带;Western blot、ELISA和中和试验检测结果表明:真核表达的蛋白与抗新城疫病毒的抗体发生特异性反应,说明F蛋白具有很好的免疫原性.采用活体电击法以真核表达质粒pSV-F免疫3周龄SPF鸡,剂量为50μg/只,3周后加强免疫1次,5周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的F基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,攻毒前后每周分别以喉拭子进行病毒分离和HI效价测定.结果显示对照组在攻毒前一直没有检测到抗体效价,攻毒后检测效价为3.0 log2±1.40,并且于攻毒后第9天全部死亡;活疫苗组和实验组免疫后第2周检测到抗体效价,第5周最高,HI效价分别为8.3 1og2±1.30和7.2log2±1.23,攻毒1周后HI效价分别达9.8log2±1.55和8.9log2±1.77,极显著高于对照组(P＜0.01).免疫组未分离到新城疫病毒,对照组全部分离到新城疫病毒.表明所构建的F基因真核表达质粒可作为候选基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应.
근거GenBank보도적계신성역병독F기인서렬설계료일대인물,이계신성역병독HeB02분리주기인조위모판,통과RT-PCR확증출료1.66kb좌우적F기인편단,서렬분석표명HeB02주F기인여국내표준강독주F48 E9급약독역묘La Sota화Clone30적F기인핵감산서렬적동원성분별위88.1%、84.9%화83.8%.장HeB02주F기인삽입진핵표체재체pVAX1중,구건료진핵표체질립pSV-F,통과지질체전염COS-7세포,SDS-PAGE분석가견표체적특이단백조대;Western blot、ELISA화중화시험검측결과표명:진핵표체적단백여항신성역병독적항체발생특이성반응,설명F단백구유흔호적면역원성.채용활체전격법이진핵표체질립pSV-F면역3주령SPF계,제량위50μg/지,3주후가강면역1차,5주후이100배계배감염제량(EID)적F기인동원병독대소유계진행공독,공독전후매주분별이후식자진행병독분리화HI효개측정.결과현시대조조재공독전일직몰유검측도항체효개,공독후검측효개위3.0 log2±1.40,병차우공독후제9천전부사망;활역묘조화실험조면역후제2주검측도항체효개,제5주최고,HI효개분별위8.3 1og2±1.30화7.2log2±1.23,공독1주후HI효개분별체9.8log2±1.55화8.9log2±1.77,겁현저고우대조조(P＜0.01).면역조미분리도신성역병독,대조조전부분리도신성역병독.표명소구건적F기인진핵표체질립가작위후선기인역묘유도계산생면역보호반응.