北京生物医学工程
北京生物醫學工程
북경생물의학공정
BEIJING BIOMEDICAL ENGINEERING
2006年
4期
420-422,444
,共4页
陈德珩%李体远%朱莹%刘争红%毕晓%黄瑞芳%戴勇
陳德珩%李體遠%硃瑩%劉爭紅%畢曉%黃瑞芳%戴勇
진덕형%리체원%주형%류쟁홍%필효%황서방%대용
胰岛素样生长因子%融合蛋白%表达
胰島素樣生長因子%融閤蛋白%錶達
이도소양생장인자%융합단백%표체
目的 通过重组技术,对胰岛素样生长因子IGF-Ⅰ基因进行缺失、突变以获得最有利于高水平表达的IGF-Ⅰ cDNA.构建原核表达载体,并进行表达,以获得能够高水平表达高活性产物的基因工程菌珠.方法 提取人肝脏组织总RNA,RT-PCR后琼脂糖电泳初步鉴定产物.将cDNA回收、补平后插入克隆质粒KS,酶切鉴定后,对IGF-Ⅰ基因进行序列分析.采用PCR法从克隆质粒中扩增IGF-Ⅰ片段,亚克隆至pET-DsbA原核表达载体,酶切鉴定,并进行序列测定.转化到大肠杆菌BL21(DE3)PLysS中,IPTG诱导表达,聚丙稀酰胺凝胶电泳、Western Blot分析目的蛋白.结果 成功构建原核表达载体pET-DsbA-IGF-Ⅰ,测序结果与预期序列完全一致,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达出IGF-Ⅰ融合蛋白.结论 IGF-Ⅰ融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3) PLysS中的表达,对进一步研究IGF-Ⅰ的功能及开发其生物制品具有重要意义.
目的 通過重組技術,對胰島素樣生長因子IGF-Ⅰ基因進行缺失、突變以穫得最有利于高水平錶達的IGF-Ⅰ cDNA.構建原覈錶達載體,併進行錶達,以穫得能夠高水平錶達高活性產物的基因工程菌珠.方法 提取人肝髒組織總RNA,RT-PCR後瓊脂糖電泳初步鑒定產物.將cDNA迴收、補平後插入剋隆質粒KS,酶切鑒定後,對IGF-Ⅰ基因進行序列分析.採用PCR法從剋隆質粒中擴增IGF-Ⅰ片段,亞剋隆至pET-DsbA原覈錶達載體,酶切鑒定,併進行序列測定.轉化到大腸桿菌BL21(DE3)PLysS中,IPTG誘導錶達,聚丙稀酰胺凝膠電泳、Western Blot分析目的蛋白.結果 成功構建原覈錶達載體pET-DsbA-IGF-Ⅰ,測序結果與預期序列完全一緻,併在大腸桿菌BL21(DE3)plysS錶達齣IGF-Ⅰ融閤蛋白.結論 IGF-Ⅰ融閤蛋白在大腸桿菌BL21(DE3) PLysS中的錶達,對進一步研究IGF-Ⅰ的功能及開髮其生物製品具有重要意義.
목적 통과중조기술,대이도소양생장인자IGF-Ⅰ기인진행결실、돌변이획득최유리우고수평표체적IGF-Ⅰ cDNA.구건원핵표체재체,병진행표체,이획득능구고수평표체고활성산물적기인공정균주.방법 제취인간장조직총RNA,RT-PCR후경지당전영초보감정산물.장cDNA회수、보평후삽입극륭질립KS,매절감정후,대IGF-Ⅰ기인진행서렬분석.채용PCR법종극륭질립중확증IGF-Ⅰ편단,아극륭지pET-DsbA원핵표체재체,매절감정,병진행서렬측정.전화도대장간균BL21(DE3)PLysS중,IPTG유도표체,취병희선알응효전영、Western Blot분석목적단백.결과 성공구건원핵표체재체pET-DsbA-IGF-Ⅰ,측서결과여예기서렬완전일치,병재대장간균BL21(DE3)plysS표체출IGF-Ⅰ융합단백.결론 IGF-Ⅰ융합단백재대장간균BL21(DE3) PLysS중적표체,대진일보연구IGF-Ⅰ적공능급개발기생물제품구유중요의의.
