南京医科大学学报（自然科学版）
南京醫科大學學報（自然科學版）
남경의과대학학보（자연과학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS NANJING
2007年
8期
839-842,封3
,共5页
杨晓玉%何韶衡%黄阗%方泽漫%李桂双
楊曉玉%何韶衡%黃闐%方澤漫%李桂雙
양효옥%하소형%황전%방택만%리계쌍
蛋白酶激活受体-2%单克隆抗体%杂交瘤细胞%A549细胞
蛋白酶激活受體-2%單剋隆抗體%雜交瘤細胞%A549細胞
단백매격활수체-2%단극륭항체%잡교류세포%A549세포
目的:制备出一种具有多种用途的抗蛋白酶激活受体-2(PAR-2)单克隆抗体(mAb).方法:用人工合成的11肽PAR-2作为免疫原,采用皮下多点注射方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞采用间接ELISA法筛选.通过ELISA、Dot blot、免疫组化染色、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性.结果:获得1株可稳定分泌抗:PAR-2 mAb的杂交瘤细胞.其分泌的mAb为IgM型,ELJSA法检测杂交瘤细胞培养上清效价为1:16;点杂交分析表明此抗体可特异性结合PAR-2;免疫组化染色显示该单克隆抗体与人肺组织中的肺泡上皮细胞和平滑肌细胞,结肠组织中的腺上皮细胞和疑似淋巴细胞,扁桃体中的淋巴细胞,包皮组织中的鳞状上皮细胞呈阳性反应;流式细胞仪分析显示与人肺腺癌细胞系A549细胞中的PAR-2呈阳性反应;激光共聚焦扫描显微镜观察发现荧光标记的阳性反应物位于A549细胞的胞膜和胞浆.结论:成功地制备出可用于免疫组化和点杂交的抗PAR-2单克隆抗体,为PAR-2相关性疾病的研究提供了有用的工具.
目的:製備齣一種具有多種用途的抗蛋白酶激活受體-2(PAR-2)單剋隆抗體(mAb).方法:用人工閤成的11肽PAR-2作為免疫原,採用皮下多點註射方法免疫BALB/c小鼠,取其脾細胞與NS-1骨髓瘤細胞融閤,雜交瘤細胞採用間接ELISA法篩選.通過ELISA、Dot blot、免疫組化染色、流式細胞分析、激光共聚焦顯微鏡技術鑒定mAb的特異性.結果:穫得1株可穩定分泌抗:PAR-2 mAb的雜交瘤細胞.其分泌的mAb為IgM型,ELJSA法檢測雜交瘤細胞培養上清效價為1:16;點雜交分析錶明此抗體可特異性結閤PAR-2;免疫組化染色顯示該單剋隆抗體與人肺組織中的肺泡上皮細胞和平滑肌細胞,結腸組織中的腺上皮細胞和疑似淋巴細胞,扁桃體中的淋巴細胞,包皮組織中的鱗狀上皮細胞呈暘性反應;流式細胞儀分析顯示與人肺腺癌細胞繫A549細胞中的PAR-2呈暘性反應;激光共聚焦掃描顯微鏡觀察髮現熒光標記的暘性反應物位于A549細胞的胞膜和胞漿.結論:成功地製備齣可用于免疫組化和點雜交的抗PAR-2單剋隆抗體,為PAR-2相關性疾病的研究提供瞭有用的工具.
목적:제비출일충구유다충용도적항단백매격활수체-2(PAR-2)단극륭항체(mAb).방법:용인공합성적11태PAR-2작위면역원,채용피하다점주사방법면역BALB/c소서,취기비세포여NS-1골수류세포융합,잡교류세포채용간접ELISA법사선.통과ELISA、Dot blot、면역조화염색、류식세포분석、격광공취초현미경기술감정mAb적특이성.결과:획득1주가은정분비항:PAR-2 mAb적잡교류세포.기분비적mAb위IgM형,ELJSA법검측잡교류세포배양상청효개위1:16;점잡교분석표명차항체가특이성결합PAR-2;면역조화염색현시해단극륭항체여인폐조직중적폐포상피세포화평활기세포,결장조직중적선상피세포화의사림파세포,편도체중적림파세포,포피조직중적린상상피세포정양성반응;류식세포의분석현시여인폐선암세포계A549세포중적PAR-2정양성반응;격광공취초소묘현미경관찰발현형광표기적양성반응물위우A549세포적포막화포장.결론:성공지제비출가용우면역조화화점잡교적항PAR-2단극륭항체,위PAR-2상관성질병적연구제공료유용적공구.
