江西农业大学学报
江西農業大學學報
강서농업대학학보
ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS JIANGXIENSIS
2007年
4期
680-684
,共5页
蔡宁波%赵永莉%潘建菁%黄湘文%张君诚%庄伟建
蔡寧波%趙永莉%潘建菁%黃湘文%張君誠%莊偉建
채저파%조영리%반건정%황상문%장군성%장위건
花生%种仁%消减杂交%基因筛选
花生%種仁%消減雜交%基因篩選
화생%충인%소감잡교%기인사선
应用抑制消减杂交技术,以花生种仁cDNA作为消减杂交的试验方(tester),以花生果皮cDNA作为驱动方(driver)进行消减杂交.经过两轮抑制PCR后,将第2次PCR产物与pGEM-T Easy 载体相连,电击转化大肠杆菌,成功构建种仁特异表达cDNA文库.所长出菌落中91.2%为白色克隆,采用PCR法对阳性克隆进行鉴定,发现其中单一扩增条带的克隆约占86.5%,片段大小集中分布于200～800bp之间.用花生种仁cDNA探针和果皮cDNA探针分别对文库高密度杂交点阵膜进行反向Northern杂交检测.根据杂交结果,初步从文库中挑取出254个差异点.花生种仁特异表达基因的初步筛选,为了解花生产量、品质形成相关的重要功能基因,也为将来应用植物基因工程手段改良花生产量和品质奠定基础.
應用抑製消減雜交技術,以花生種仁cDNA作為消減雜交的試驗方(tester),以花生果皮cDNA作為驅動方(driver)進行消減雜交.經過兩輪抑製PCR後,將第2次PCR產物與pGEM-T Easy 載體相連,電擊轉化大腸桿菌,成功構建種仁特異錶達cDNA文庫.所長齣菌落中91.2%為白色剋隆,採用PCR法對暘性剋隆進行鑒定,髮現其中單一擴增條帶的剋隆約佔86.5%,片段大小集中分佈于200～800bp之間.用花生種仁cDNA探針和果皮cDNA探針分彆對文庫高密度雜交點陣膜進行反嚮Northern雜交檢測.根據雜交結果,初步從文庫中挑取齣254箇差異點.花生種仁特異錶達基因的初步篩選,為瞭解花生產量、品質形成相關的重要功能基因,也為將來應用植物基因工程手段改良花生產量和品質奠定基礎.
응용억제소감잡교기술,이화생충인cDNA작위소감잡교적시험방(tester),이화생과피cDNA작위구동방(driver)진행소감잡교.경과량륜억제PCR후,장제2차PCR산물여pGEM-T Easy 재체상련,전격전화대장간균,성공구건충인특이표체cDNA문고.소장출균락중91.2%위백색극륭,채용PCR법대양성극륭진행감정,발현기중단일확증조대적극륭약점86.5%,편단대소집중분포우200～800bp지간.용화생충인cDNA탐침화과피cDNA탐침분별대문고고밀도잡교점진막진행반향Northern잡교검측.근거잡교결과,초보종문고중도취출254개차이점.화생충인특이표체기인적초보사선,위료해화생산량、품질형성상관적중요공능기인,야위장래응용식물기인공정수단개량화생산량화품질전정기출.
