植物资源与环境学报
植物資源與環境學報
식물자원여배경학보
JOURNAL OF PLANT RESOURCES AND ENVIRONMENT
2009年
3期
44-49
,共6页
张飞%陈发棣%房伟民%李风童%刘浦生
張飛%陳髮棣%房偉民%李風童%劉浦生
장비%진발체%방위민%리풍동%류포생
菊花%SRAP-PCR%正交实验设计%反应体系优化
菊花%SRAP-PCR%正交實驗設計%反應體繫優化
국화%SRAP-PCR%정교실험설계%반응체계우화
采用L16(45)正交实验设计,对SRAP-PCR反应体系中Mg2+ 、 dNTPs和引物浓度以及Taq DNA聚合酶和模板DNA用量等5个因素进行了优化,并确立了适合菊花[Dendranthema×grandiflorum (Ramat.) Kitamura]SRAP-PCR的反应体系.菊花的SRAP-PCR最佳反应体系为:反应体系总体积20 μL,含3.125 mmol·L-1 Mg2+ 、187.5 μmol·L-1 dNTPs、10.0 μmol·L-1引物、50 ng模板DNA、0.5 U Taq DNA 聚合酶及1×PCR buffer.各因素对菊花基因组DNA SRAP-PCR扩增结果的影响程度不同,其中dNTPs浓度影响最大,Taq DNA聚合酶用量的影响最小.运用菊花品种'奥运含笑'和'雨花落英'及二者的F1杂交后代单株的基因组DNA对优化的SRAP-PCR反应体系进行验证,均获得了多态性丰富、条带清晰的扩增图谱,表明所确立的菊花SRAP-PCR反应体系稳定可靠.
採用L16(45)正交實驗設計,對SRAP-PCR反應體繫中Mg2+ 、 dNTPs和引物濃度以及Taq DNA聚閤酶和模闆DNA用量等5箇因素進行瞭優化,併確立瞭適閤菊花[Dendranthema×grandiflorum (Ramat.) Kitamura]SRAP-PCR的反應體繫.菊花的SRAP-PCR最佳反應體繫為:反應體繫總體積20 μL,含3.125 mmol·L-1 Mg2+ 、187.5 μmol·L-1 dNTPs、10.0 μmol·L-1引物、50 ng模闆DNA、0.5 U Taq DNA 聚閤酶及1×PCR buffer.各因素對菊花基因組DNA SRAP-PCR擴增結果的影響程度不同,其中dNTPs濃度影響最大,Taq DNA聚閤酶用量的影響最小.運用菊花品種'奧運含笑'和'雨花落英'及二者的F1雜交後代單株的基因組DNA對優化的SRAP-PCR反應體繫進行驗證,均穫得瞭多態性豐富、條帶清晰的擴增圖譜,錶明所確立的菊花SRAP-PCR反應體繫穩定可靠.
채용L16(45)정교실험설계,대SRAP-PCR반응체계중Mg2+ 、 dNTPs화인물농도이급Taq DNA취합매화모판DNA용량등5개인소진행료우화,병학립료괄합국화[Dendranthema×grandiflorum (Ramat.) Kitamura]SRAP-PCR적반응체계.국화적SRAP-PCR최가반응체계위:반응체계총체적20 μL,함3.125 mmol·L-1 Mg2+ 、187.5 μmol·L-1 dNTPs、10.0 μmol·L-1인물、50 ng모판DNA、0.5 U Taq DNA 취합매급1×PCR buffer.각인소대국화기인조DNA SRAP-PCR확증결과적영향정도불동,기중dNTPs농도영향최대,Taq DNA취합매용량적영향최소.운용국화품충'오운함소'화'우화락영'급이자적F1잡교후대단주적기인조DNA대우화적SRAP-PCR반응체계진행험증,균획득료다태성봉부、조대청석적확증도보,표명소학립적국화SRAP-PCR반응체계은정가고.
