中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2002年
5期
505-509
,共5页
冯国和%赵桂珍%竹上勉%窦晓光%乔光彦%周子文
馮國和%趙桂珍%竹上勉%竇曉光%喬光彥%週子文
풍국화%조계진%죽상면%두효광%교광언%주자문
流行性乙型脑炎病毒%重组质粒%蛋白表达%DNA免疫
流行性乙型腦炎病毒%重組質粒%蛋白錶達%DNA免疫
류행성을형뇌염병독%중조질립%단백표체%DNA면역
目的研究乙脑病毒prME、E蛋白的体外表达特点,比较不同重组质粒所进行的DNA免疫效率. 方法分别将乙脑病毒(JaGAr-01株)prME、E蛋白编码基因(2 001bp、1 500bp)构建于融合FLAG标记基因的真核表达载体pcDNA(FLAG)3上(pJME、pJE),脂质体法将二重组质粒转染于HepG2及COS-1细胞系;采用不同抗体系统(anti-FLAG、anti-E),经Western blot法检测乙脑病毒prME[相对分子质量(Mr)约72×103]与E(Mr约54×103)蛋白表达水平;将质粒肌注BALB/c鼠,二次免疫后3周, 腹腔注射乙脑病毒(105PFU/100μl)作为病毒攻击并观察21 d.80%空斑减少中和实验法检测中和抗体滴度变化. 结果 anti-FLAG可检测到由质粒pJME、pJE编码的相应蛋白产物在转染细胞内表达,同时在pJME转染的细胞内检测到一个新的11×103的低Mr蛋白.anti-E仅在pJME转染的细胞内检测到E蛋白.肌注pJME可产生高水平中和抗体滴度以及诱导有效的保护性免疫,效果等同于普通灭活JE疫苗,但优于pJE. 结论 pJME的体外表达水平优于pJE.DNA免疫实验结果与prME、E蛋白体外表达特点相一致.
目的研究乙腦病毒prME、E蛋白的體外錶達特點,比較不同重組質粒所進行的DNA免疫效率. 方法分彆將乙腦病毒(JaGAr-01株)prME、E蛋白編碼基因(2 001bp、1 500bp)構建于融閤FLAG標記基因的真覈錶達載體pcDNA(FLAG)3上(pJME、pJE),脂質體法將二重組質粒轉染于HepG2及COS-1細胞繫;採用不同抗體繫統(anti-FLAG、anti-E),經Western blot法檢測乙腦病毒prME[相對分子質量(Mr)約72×103]與E(Mr約54×103)蛋白錶達水平;將質粒肌註BALB/c鼠,二次免疫後3週, 腹腔註射乙腦病毒(105PFU/100μl)作為病毒攻擊併觀察21 d.80%空斑減少中和實驗法檢測中和抗體滴度變化. 結果 anti-FLAG可檢測到由質粒pJME、pJE編碼的相應蛋白產物在轉染細胞內錶達,同時在pJME轉染的細胞內檢測到一箇新的11×103的低Mr蛋白.anti-E僅在pJME轉染的細胞內檢測到E蛋白.肌註pJME可產生高水平中和抗體滴度以及誘導有效的保護性免疫,效果等同于普通滅活JE疫苗,但優于pJE. 結論 pJME的體外錶達水平優于pJE.DNA免疫實驗結果與prME、E蛋白體外錶達特點相一緻.
목적연구을뇌병독prME、E단백적체외표체특점,비교불동중조질립소진행적DNA면역효솔. 방법분별장을뇌병독(JaGAr-01주)prME、E단백편마기인(2 001bp、1 500bp)구건우융합FLAG표기기인적진핵표체재체pcDNA(FLAG)3상(pJME、pJE),지질체법장이중조질립전염우HepG2급COS-1세포계;채용불동항체계통(anti-FLAG、anti-E),경Western blot법검측을뇌병독prME[상대분자질량(Mr)약72×103]여E(Mr약54×103)단백표체수평;장질립기주BALB/c서,이차면역후3주, 복강주사을뇌병독(105PFU/100μl)작위병독공격병관찰21 d.80%공반감소중화실험법검측중화항체적도변화. 결과 anti-FLAG가검측도유질립pJME、pJE편마적상응단백산물재전염세포내표체,동시재pJME전염적세포내검측도일개신적11×103적저Mr단백.anti-E부재pJME전염적세포내검측도E단백.기주pJME가산생고수평중화항체적도이급유도유효적보호성면역,효과등동우보통멸활JE역묘,단우우pJE. 결론 pJME적체외표체수평우우pJE.DNA면역실험결과여prME、E단백체외표체특점상일치.
