微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2008年
1期
98-102
,共5页
潘华奇%曹瑞兵%刘磊%孙海亮%姬向波%陈勇军%陈溥言
潘華奇%曹瑞兵%劉磊%孫海亮%姬嚮波%陳勇軍%陳溥言
반화기%조서병%류뢰%손해량%희향파%진용군%진부언
鸭瘟病毒%gB蛋白%原核表达%抗原域%间接ELISA
鴨瘟病毒%gB蛋白%原覈錶達%抗原域%間接ELISA
압온병독%gB단백%원핵표체%항원역%간접ELISA
在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因.将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoR Ⅰ和HindⅢ之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1.将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了DPV gB蛋白主要抗原域的高效表达.免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性.应用His·Bind亲和层析柱纯化重组DPV gB蛋白,以纯化的重组gB1蛋白作为检测抗原,初步建立了检测鸭瘟病毒抗体的igB1-ELISA.结果表明,抗原的最佳包被浓度为6.5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:待检血清OD490＞0.4,且待检血清OD490/阴性血清OD490＞2.应用igB1-ELISA对鸭血清样品进行检测,结果表明igB1-ELISA与全病毒包被的iDPV-ELISA符合率达到95.6%.
在分析鴨瘟病毒gB蛋白抗原性的基礎上,設計一對引物剋隆gB蛋白N耑抗原性較好的抗原域編碼基因.將剋隆的基因定嚮插入pET-32a的EcoR Ⅰ和HindⅢ之間,構建瞭gB蛋白主要抗原域原覈錶達載體pET-gB1.將pET-gB1質粒轉化BL(21)宿主菌後,對培養和錶達條件進行瞭優化,實現瞭DPV gB蛋白主要抗原域的高效錶達.免疫印跡試驗錶明穫得的錶達產物具有良好的反應原性.應用His·Bind親和層析柱純化重組DPV gB蛋白,以純化的重組gB1蛋白作為檢測抗原,初步建立瞭檢測鴨瘟病毒抗體的igB1-ELISA.結果錶明,抗原的最佳包被濃度為6.5μg/mL,血清的最佳稀釋度為1∶80,暘性標準初步定為:待檢血清OD490＞0.4,且待檢血清OD490/陰性血清OD490＞2.應用igB1-ELISA對鴨血清樣品進行檢測,結果錶明igB1-ELISA與全病毒包被的iDPV-ELISA符閤率達到95.6%.
재분석압온병독gB단백항원성적기출상,설계일대인물극륭gB단백N단항원성교호적항원역편마기인.장극륭적기인정향삽입pET-32a적EcoR Ⅰ화HindⅢ지간,구건료gB단백주요항원역원핵표체재체pET-gB1.장pET-gB1질립전화BL(21)숙주균후,대배양화표체조건진행료우화,실현료DPV gB단백주요항원역적고효표체.면역인적시험표명획득적표체산물구유량호적반응원성.응용His·Bind친화층석주순화중조DPV gB단백,이순화적중조gB1단백작위검측항원,초보건립료검측압온병독항체적igB1-ELISA.결과표명,항원적최가포피농도위6.5μg/mL,혈청적최가희석도위1∶80,양성표준초보정위:대검혈청OD490＞0.4,차대검혈청OD490/음성혈청OD490＞2.응용igB1-ELISA대압혈청양품진행검측,결과표명igB1-ELISA여전병독포피적iDPV-ELISA부합솔체도95.6%.
