CAJ | 학술논문

以连接在pMD-18T载体上的香蕉条斑病毒云南分离物(BSV)全基因组为模板,设计特异引物,PCR扩增获得ORFI全长序列.目的片段及原核表达载体pET32(b)分别经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,连接构建重组质粒pET32-ORF Ⅰ,将鉴定为正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得原核表达OFR Ⅰ工程菌.工程菌在28℃条件下,用浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导表达6h,离心收集菌液并超声波破碎,获得以含目的肽段的可溶性蛋白为主的融合蛋白.将融合蛋白通过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,得到纯度较高的融合蛋白.以此蛋白为抗原免疫家兔,获得特异抗血清,该抗血清的效价达1∶100000,Western Blot验证表明,抗血清的特异性较强.本研究为BSV的快速检测以及BSV编码蛋白的功能研究奠定了基础.
이련접재pMD-18T재체상적향초조반병독운남분리물(BSV)전기인조위모판,설계특이인물,PCR확증획득ORFI전장서렬.목적편단급원핵표체재체pET32(b)분별경EcoR Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절후,련접구건중조질립pET32-ORF Ⅰ,장감정위정학적중조질립전화E.coli BL21(DE3)감수태세포,획득원핵표체OFR Ⅰ공정균.공정균재28℃조건하,용농도위0.1 mmol/L적IPTG유도표체6h,리심수집균액병초성파파쇄,획득이함목적태단적가용성단백위주적융합단백.장융합단백통과Ni2+-NTA친화층석주순화후,득도순도교고적융합단백.이차단백위항원면역가토,획득특이항혈청,해항혈청적효개체1∶100000,Western Blot험증표명,항혈청적특이성교강.본연구위BSV적쾌속검측이급BSV편마단백적공능연구전정료기출.