CAJ | 학술논문

目的探讨体外快速培养犬膀胱平滑肌细胞的方法及观察膀胱平滑肌细胞在脱细胞小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)上的生长状况,为构建组织工程膀胱平滑肌组织提供实验依据.方法分别采用酶消化法和组织块培养法分离、获取和原代培养犬膀胱平滑肌细胞,倒置相差显微镜下观察细胞的生长情况,透射电镜观察细胞的超微结构,免疫组织化学染色进行细胞鉴定.将犬膀胱平滑肌细胞接种到SIS支架材料上,于复合培养5、7及9 d取材,行苏木素染色、石蜡切片HE染色和扫描电镜观察膀胱平滑肌细胞在SIS上的生长状况.以细胞-SIS复合培养组为实验组,以膀胱平滑肌细胞为对照组,每组各设9孔,分别于接种后3、5及7 d取材,酶消化后收集细胞并计数.结果酶消化法原代培养获取犬膀胱平滑肌细胞数量多,细胞生长速度快,形态良好,培养5 d细胞在培养瓶底生长汇合.组织块培养法接种3 d见长梭形的膀胱平滑肌细胞从植块边缘萌出,获取的细胞数量较少.透射电镜下见膀胱平滑肌细胞胞质中有特征性细肌丝和细胞膜的密斑.抗α-肌动蛋白免疫组织化学染色胞浆呈棕黄色阳性反应.膀胱平滑肌细胞在SIS表面能黏附、生长和增殖.体外复合培养5 d后,膀胱平滑肌细胞铺满SIS表面,呈单层细胞结构.7、9 d细胞形态与5 d相似.实验组3、5及7 d的细胞计数分别为(16.85±0.79)×105、(39.74±2.16)×105及(37.15±2.02)×105个,对照组分别为(19.43±0.54)×105、(34.50±1.85)×105及(33.07±1.31)×105个.两组5 d细胞计数差异有统计学意义(P＜0.05).结论酶消化法原代培养膀胱平滑肌细胞可提供大量活性良好的种子细胞.SIS支持膀胱平滑肌细胞黏附和生长,可为构建组织工程膀胱平滑肌组织提供良好支架.
목적 탐토체외쾌속배양견방광평활기세포적방법급관찰방광평활기세포재탈세포소장점막하층(small intestinal submucosa,SIS)상적생장상황,위구건조직공정방광평활기조직제공실험의거.방법 분별채용매소화법화조직괴배양법분리、획취화원대배양견방광평활기세포,도치상차현미경하관찰세포적생장정황,투사전경관찰세포적초미결구,면역조직화학염색진행세포감정.장견방광평활기세포접충도SIS지가재료상,우복합배양5、7급9 d취재,행소목소염색、석사절편HE염색화소묘전경관찰방광평활기세포재SIS상적생장상황.이세포-SIS복합배양조위실험조,이방광평활기세포위대조조,매조각설9공,분별우접충후3、5급7 d취재,매소화후수집세포병계수.결과 매소화법원대배양획취견방광평활기세포수량다,세포생장속도쾌,형태량호,배양5 d세포재배양병저생장회합.조직괴배양법접충3 d견장사형적방광평활기세포종식괴변연맹출,획취적세포수량교소.투사전경하견방광평활기세포포질중유특정성세기사화세포막적밀반.항α-기동단백면역조직화학염색포장정종황색양성반응.방광평활기세포재SIS표면능점부、생장화증식.체외복합배양5 d후,방광평활기세포포만SIS표면,정단층세포결구.7、9 d세포형태여5 d상사.실험조3、5급7 d적세포계수분별위(16.85±0.79)×105、(39.74±2.16)×105급(37.15±2.02)×105개,대조조분별위(19.43±0.54)×105、(34.50±1.85)×105급(33.07±1.31)×105개.량조5 d세포계수차이유통계학의의(P＜0.05).결론 매소화법원대배양방광평활기세포가제공대량활성량호적충자세포.SIS지지방광평활기세포점부화생장,가위구건조직공정방광평활기조직제공량호지가.