生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
3期
141-145
,共5页
李彬%鲍文蕾%张涛%侯鑫%郭旭东%王潇%王志钢%刘东军
李彬%鮑文蕾%張濤%侯鑫%郭旭東%王瀟%王誌鋼%劉東軍
리빈%포문뢰%장도%후흠%곽욱동%왕소%왕지강%류동군
内蒙古白绒山羊%淋巴样增强因子-1%毛囊特异性表达载体%稳定转染
內矇古白絨山羊%淋巴樣增彊因子-1%毛囊特異性錶達載體%穩定轉染
내몽고백융산양%림파양증강인자-1%모낭특이성표체재체%은정전염
旨在构建内蒙古白绒山羊(Capra hircus)淋巴样增强因子-1(Lymphoid enhancer factor,LEFT)基因真核表达载体并转染胎儿成纤维细胞,获得稳定表达红色荧光蛋白及毛囊特异性表达LEFI的转基因细胞克隆.以pCDsRed2载体为基本骨架将LEFT基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,连接红色荧光蛋白表达元件,构建LEFT基因毛囊特异表达载体pCDsRedKL.外源表达载体以lipofectamineT"2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆.PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合.测序显示构建的表达载体pCDsRed-KL序列中,LEF1基因正确连接在KAP6-1启动子下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确.脂质体介导的稳定转染效率约为14.0%,经G418筛选得到高效表达红色荧光蛋白转基因细胞克隆.PCR检测显示外源KAP6-1启动子和LEFI基因整合到胎儿成纤维细胞基因组中.
旨在構建內矇古白絨山羊(Capra hircus)淋巴樣增彊因子-1(Lymphoid enhancer factor,LEFT)基因真覈錶達載體併轉染胎兒成纖維細胞,穫得穩定錶達紅色熒光蛋白及毛囊特異性錶達LEFI的轉基因細胞剋隆.以pCDsRed2載體為基本骨架將LEFT基因亞剋隆到KAP6-1啟動子下遊,連接紅色熒光蛋白錶達元件,構建LEFT基因毛囊特異錶達載體pCDsRedKL.外源錶達載體以lipofectamineT"2000介導轉染胎兒成纖維細胞,通過G418篩選穫得穩定轉染的細胞剋隆.PCR鑒定外源基因在細胞基因組中的整閤.測序顯示構建的錶達載體pCDsRed-KL序列中,LEF1基因正確連接在KAP6-1啟動子下遊,順序連接CMV啟動子和紅色熒光蛋白基因,載體構建正確.脂質體介導的穩定轉染效率約為14.0%,經G418篩選得到高效錶達紅色熒光蛋白轉基因細胞剋隆.PCR檢測顯示外源KAP6-1啟動子和LEFI基因整閤到胎兒成纖維細胞基因組中.
지재구건내몽고백융산양(Capra hircus)림파양증강인자-1(Lymphoid enhancer factor,LEFT)기인진핵표체재체병전염태인성섬유세포,획득은정표체홍색형광단백급모낭특이성표체LEFI적전기인세포극륭.이pCDsRed2재체위기본골가장LEFT기인아극륭도KAP6-1계동자하유,련접홍색형광단백표체원건,구건LEFT기인모낭특이표체재체pCDsRedKL.외원표체재체이lipofectamineT"2000개도전염태인성섬유세포,통과G418사선획득은정전염적세포극륭.PCR감정외원기인재세포기인조중적정합.측서현시구건적표체재체pCDsRed-KL서렬중,LEF1기인정학련접재KAP6-1계동자하유,순서련접CMV계동자화홍색형광단백기인,재체구건정학.지질체개도적은정전염효솔약위14.0%,경G418사선득도고효표체홍색형광단백전기인세포극륭.PCR검측현시외원KAP6-1계동자화LEFI기인정합도태인성섬유세포기인조중.
