快速检测A型流感病毒的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法的建立
쾌속검측A형류감병독적TaqMan실시형광정량RT-PCR방법적건립
DESIGN AND VALIDATION OF REAL-TIME TAQMAN FLUORESCENCE QUANTITATIVE RT-PCR ASSAY FOR RAPID DETECTION OFTYPE A IUFLUENZA VIRUS
  • 万方数据
    中国动物传染病学报 중국동물전염병학보
    CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
    2010年 3期 1-7 ,共7页

    马继红%于海%周艳君%李国新%闫丽萍%张善瑞%王斌%童光志

    마계홍%우해%주염군%리국신%염려평%장선서%왕빈%동광지

    A型流感病毒%TaqMan探针%实时荧光定量RT-PCR A型流感病毒%TaqMan探針%實時熒光定量RT-PCR
    A형류감병독%TaqMan탐침%실시형광정량RT-PCR
    根据A型流感病毒基质蛋白(matrix protein,M)基因保守序列设计并合成特异性引物和TaqMan BHQ探针,建立快速检测A型流感病毒的实时荧光定量RT-PCR方法.通过RT-PCR方法克隆A型流感病毒M基因靶序列并将其连入pMD-18T载体,制备阳性标准品,优化反应条件,以10倍系列稀释的标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.998.检测结果显示,该方法的灵敏度可达10 copies/μL或1 EID50病毒且特异性良好,除A型流感病毒外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪输血传播病毒检测结果均为阴性.该方法重复性好,批内和批间变异系数均小于3%.对40份实验感染样品的检测结果表明,该方法与病毒分离结果一致,比常规RT-PCR检测方法灵敏度更高,特异性更强.
    근거A형류감병독기질단백(matrix protein,M)기인보수서렬설계병합성특이성인물화TaqMan BHQ탐침,건립쾌속검측A형류감병독적실시형광정량RT-PCR방법.통과RT-PCR방법극륭A형류감병독M기인파서렬병장기련입pMD-18T재체,제비양성표준품,우화반응조건,이10배계렬희석적표준품회제표준곡선,기상관계수위0.998.검측결과현시,해방법적령민도가체10 copies/μL혹1 EID50병독차특이성량호,제A형류감병독외,대저번식여호흡종합정병독、저온병독、저원배병독2형、저수혈전파병독검측결과균위음성.해방법중복성호,비내화비간변이계수균소우3%.대40빈실험감염양품적검측결과표명,해방법여병독분리결과일치,비상규RT-PCR검측방법령민도경고,특이성경강.
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