分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2010年
3期
619-625
,共7页
陈璇%胡尊红%郭鸿彦%张庆滢%许艳萍%郭孟璧%杨明
陳璇%鬍尊紅%郭鴻彥%張慶瀅%許豔萍%郭孟璧%楊明
진선%호존홍%곽홍언%장경형%허염평%곽맹벽%양명
抗大麻%DNA提取%优化%AFLP
抗大痳%DNA提取%優化%AFLP
항대마%DNA제취%우화%AFLP
本研究以大麻嫩叶为材料,以改进的SDS法,提取了高质量的大麻基因组DNA,经过酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验条件的优化,建立了AFLP反应体系.研究结果表明:在常规的SDS提取液里加入8μL/mL β-巯基乙醇(V/V)和3%PVP(M/V)能够提取到高质量的适用于AFLP的基因组DNA;选取150 ng大麻基因组DNA来进行酶切,EcoR Ⅰ和Mse Ⅰ各0.5 U,在37℃酶切4 h,即可完全酶切.最优的选择性扩增体系为20 μL反应体系中含有1.0 U Taq DNA polymerase、1.0 μL 25mmol/L Mg2+、0.4μL 10mmol/LdNZPs、50 ng/μL引物各1.0 μL、4.0 μL稀释50倍的预扩增产物及2μL 10×PCR Buffer;使用该方法,获得了清晰、稳定的图谱并筛选到了18对多态性较好的AFLP引物组合.
本研究以大痳嫩葉為材料,以改進的SDS法,提取瞭高質量的大痳基因組DNA,經過酶切、連接、預擴增、選擇性擴增、銀染等試驗條件的優化,建立瞭AFLP反應體繫.研究結果錶明:在常規的SDS提取液裏加入8μL/mL β-巰基乙醇(V/V)和3%PVP(M/V)能夠提取到高質量的適用于AFLP的基因組DNA;選取150 ng大痳基因組DNA來進行酶切,EcoR Ⅰ和Mse Ⅰ各0.5 U,在37℃酶切4 h,即可完全酶切.最優的選擇性擴增體繫為20 μL反應體繫中含有1.0 U Taq DNA polymerase、1.0 μL 25mmol/L Mg2+、0.4μL 10mmol/LdNZPs、50 ng/μL引物各1.0 μL、4.0 μL稀釋50倍的預擴增產物及2μL 10×PCR Buffer;使用該方法,穫得瞭清晰、穩定的圖譜併篩選到瞭18對多態性較好的AFLP引物組閤.
본연구이대마눈협위재료,이개진적SDS법,제취료고질량적대마기인조DNA,경과매절、련접、예확증、선택성확증、은염등시험조건적우화,건립료AFLP반응체계.연구결과표명:재상규적SDS제취액리가입8μL/mL β-구기을순(V/V)화3%PVP(M/V)능구제취도고질량적괄용우AFLP적기인조DNA;선취150 ng대마기인조DNA래진행매절,EcoR Ⅰ화Mse Ⅰ각0.5 U,재37℃매절4 h,즉가완전매절.최우적선택성확증체계위20 μL반응체계중함유1.0 U Taq DNA polymerase、1.0 μL 25mmol/L Mg2+、0.4μL 10mmol/LdNZPs、50 ng/μL인물각1.0 μL、4.0 μL희석50배적예확증산물급2μL 10×PCR Buffer;사용해방법,획득료청석、은정적도보병사선도료18대다태성교호적AFLP인물조합.
