RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB
RED동원중조법고제발광광상간균정체단백기인cipA화cipB
Knockout of the Crystalline Inclusion Protein Gene cipA and cipB in Photorhabdus luminescens by RED Homologous Recombination
  • 万方数据
    基因组学与应用生物学 기인조학여응용생물학
    GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
    2009年 3期 417-421 ,共5页

    唐志如%张友明%孙志洪%黄瑞林%印遇龙

    당지여%장우명%손지홍%황서림%인우룡

    发光光状杆菌%RED同源重组%敲除%晶体蛋白 髮光光狀桿菌%RED同源重組%敲除%晶體蛋白
    발광광상간균%RED동원중조%고제%정체단백
    RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cip和cipB,为发光光状杆菌基因敲除提供方法.采用TOPO克隆方法将基因cipA和cipB克隆到质粒pTA上,获得质粒pTA-cipA和pTA-cipB;采用Red/ET方法分别将Gentd基因和Aprd基因分别插入pTA-cipA和pTA-cipB的cipA和cipB基因中,并替换cipA和cipB基因部分序列,获得pTA-GentaIncipA和pTA-ApraIncipB;pTA-GentaIncipA通过BamH Ⅰ酶切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得GentaIncipA,将GentaIncipA导入带有质粒pASK-αβγA的P luminescens subsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipA:pTA-ApraInciB用EcoR Ⅰ酶切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得ApraIncipB,将ApraIncipB导入带有质粒pASK-αβγA的P.luminescens subsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipB;42℃下热激去除突变菌中的质粒pASK-αβγA.克隆PCR和SDS-PAGE电泳结果表明发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB均被敲除.采用RED同源重组法成功地敲除了发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB.
    RED동원중조법고제발광광상간균정체단백기인cip화cipB,위발광광상간균기인고제제공방법.채용TOPO극륭방법장기인cipA화cipB극륭도질립pTA상,획득질립pTA-cipA화pTA-cipB;채용Red/ET방법분별장Gentd기인화Aprd기인분별삽입pTA-cipA화pTA-cipB적cipA화cipB기인중,병체환cipA화cipB기인부분서렬,획득pTA-GentaIncipA화pTA-ApraIncipB;pTA-GentaIncipA통과BamH Ⅰ매절,종0.7%경지당효상회수획득GentaIncipA,장GentaIncipA도입대유질립pASK-αβγA적P luminescens subsp.Akhurstii중,통과적RED동원중조고제발광광상간균정체단백cipA:pTA-ApraInciB용EcoR Ⅰ매절,종0.7%경지당효상회수획득ApraIncipB,장ApraIncipB도입대유질립pASK-αβγA적P.luminescens subsp.Akhurstii중,통과적RED동원중조고제발광광상간균정체단백cipB;42℃하열격거제돌변균중적질립pASK-αβγA.극륭PCR화SDS-PAGE전영결과표명발광광상간균정체단백기인cipA화cipB균피고제.채용RED동원중조법성공지고제료발광광상간균정체단백기인cipA화cipB.
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