实验动物与比较医学
實驗動物與比較醫學
실험동물여비교의학
LABORATORY ANIMAL AND COMPARATIVE MEDICINE
2008年
6期
361-366
,共6页
张梅英%蔺美娜%杨葳%董婉维%李兆阳%王惟%郑志红%王禄增
張梅英%藺美娜%楊葳%董婉維%李兆暘%王惟%鄭誌紅%王祿增
장매영%린미나%양위%동완유%리조양%왕유%정지홍%왕록증
DJ-1%tau%帕金森氏病
DJ-1%tau%帕金森氏病
DJ-1%tau%파금삼씨병
目的 在转染pEGFP-DJ-1和pEGFP-DJ-1L166P质粒的NIH3T3细胞中进行tau基因表达与DJ-1基因相关性的研究,为进一步建立DJ-1和DJ-1L166P转基因小鼠模型及在动物整体水平研究DJ-1基因功能和帕金森病发病机制提供实验基础.方法 采用RT-PCR的方法从人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)总RNA反转录获得DJ-1cDNA片段,采用突变试剂盒将第166位氨基酸突变,分别构建pEGFP-DJ-1和pEGFP-DJ-1L166P重组表达载体,采用脂质体转染的方法分别将pEGFPDJ-1、DEGFP-DJ-1L166P、pEGFP-C3质粒转染NIH3T3细胞并用G418压力筛选稳定克隆,对获得的三种转染细胞在转录水平和蛋白质水平进行tau基因表达的检测.结果 pEGFP-DJ-1、pEGFPDJ-1L166P、pEGFP-C3质粒转染NIH3T3细胞G418筛选后,分别获得6、2、9个阳性细胞克隆,RTPCR及westem blot 方法进行tau基因表述检测,结果均显示pEGFP-DJ-1质粒转染组tau表达低于pEGFP-C3质粒转染组,而pEGFP-DJ-1L166P质粒转染组tau表达则高于pEGFP-C3质粒转染组,实验结果统计学分析均具有明显差异(P＜0.05).结论 在转录水平及蛋白质水平,DJ-1基因使tau基因的表达下降,而DJ-1L166P使tau基因表达上升.在NIH3T3细胞中tau基因表达与DJ-1基因具有一定的相关性.
目的 在轉染pEGFP-DJ-1和pEGFP-DJ-1L166P質粒的NIH3T3細胞中進行tau基因錶達與DJ-1基因相關性的研究,為進一步建立DJ-1和DJ-1L166P轉基因小鼠模型及在動物整體水平研究DJ-1基因功能和帕金森病髮病機製提供實驗基礎.方法 採用RT-PCR的方法從人神經母細胞瘤細胞(SH-SY5Y)總RNA反轉錄穫得DJ-1cDNA片段,採用突變試劑盒將第166位氨基痠突變,分彆構建pEGFP-DJ-1和pEGFP-DJ-1L166P重組錶達載體,採用脂質體轉染的方法分彆將pEGFPDJ-1、DEGFP-DJ-1L166P、pEGFP-C3質粒轉染NIH3T3細胞併用G418壓力篩選穩定剋隆,對穫得的三種轉染細胞在轉錄水平和蛋白質水平進行tau基因錶達的檢測.結果 pEGFP-DJ-1、pEGFPDJ-1L166P、pEGFP-C3質粒轉染NIH3T3細胞G418篩選後,分彆穫得6、2、9箇暘性細胞剋隆,RTPCR及westem blot 方法進行tau基因錶述檢測,結果均顯示pEGFP-DJ-1質粒轉染組tau錶達低于pEGFP-C3質粒轉染組,而pEGFP-DJ-1L166P質粒轉染組tau錶達則高于pEGFP-C3質粒轉染組,實驗結果統計學分析均具有明顯差異(P＜0.05).結論 在轉錄水平及蛋白質水平,DJ-1基因使tau基因的錶達下降,而DJ-1L166P使tau基因錶達上升.在NIH3T3細胞中tau基因錶達與DJ-1基因具有一定的相關性.
목적 재전염pEGFP-DJ-1화pEGFP-DJ-1L166P질립적NIH3T3세포중진행tau기인표체여DJ-1기인상관성적연구,위진일보건립DJ-1화DJ-1L166P전기인소서모형급재동물정체수평연구DJ-1기인공능화파금삼병발병궤제제공실험기출.방법 채용RT-PCR적방법종인신경모세포류세포(SH-SY5Y)총RNA반전록획득DJ-1cDNA편단,채용돌변시제합장제166위안기산돌변,분별구건pEGFP-DJ-1화pEGFP-DJ-1L166P중조표체재체,채용지질체전염적방법분별장pEGFPDJ-1、DEGFP-DJ-1L166P、pEGFP-C3질립전염NIH3T3세포병용G418압력사선은정극륭,대획득적삼충전염세포재전록수평화단백질수평진행tau기인표체적검측.결과 pEGFP-DJ-1、pEGFPDJ-1L166P、pEGFP-C3질립전염NIH3T3세포G418사선후,분별획득6、2、9개양성세포극륭,RTPCR급westem blot 방법진행tau기인표술검측,결과균현시pEGFP-DJ-1질립전염조tau표체저우pEGFP-C3질립전염조,이pEGFP-DJ-1L166P질립전염조tau표체칙고우pEGFP-C3질립전염조,실험결과통계학분석균구유명현차이(P＜0.05).결론 재전록수평급단백질수평,DJ-1기인사tau기인적표체하강,이DJ-1L166P사tau기인표체상승.재NIH3T3세포중tau기인표체여DJ-1기인구유일정적상관성.
