生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
11期
1988-1992
,共5页
朱采红%俞国华%李蓓%许媛媛%俞慧清%陈建泉%钱旻%成国祥
硃採紅%俞國華%李蓓%許媛媛%俞慧清%陳建泉%錢旻%成國祥
주채홍%유국화%리배%허원원%유혜청%진건천%전민%성국상
基因打靶%启动子捕获策略%Prion病%牛胎儿成纤维细胞%Prnp
基因打靶%啟動子捕穫策略%Prion病%牛胎兒成纖維細胞%Prnp
기인타파%계동자포획책략%Prion병%우태인성섬유세포%Prnp
利用启动子捕获对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一.敲除动物的Prnp可使其具有抵抗Prion病感染的能力.采用启动子捕获策略,构建了牛Prnp启动子缺陷型打靶载体BoPrneo,线性化后,再通过电穿孔转染牛胎儿成纤维细胞BFF,用250 μg/mLG418进行药物筛选,共得到99个药物抗性细胞克隆.对细胞克隆进行PCR、测序及Southern blotting鉴定,结果表明,其中的4个细胞克隆为中靶细胞,说明牛胎儿成纤维细胞中的Prnp一条等位基因被成功敲除.本研究为牛Prnp的敲除提供了一种简单、安全、有效的方法.
利用啟動子捕穫對中靶細胞進行富集是提高體細胞基因打靶效率常用的策略之一.敲除動物的Prnp可使其具有牴抗Prion病感染的能力.採用啟動子捕穫策略,構建瞭牛Prnp啟動子缺陷型打靶載體BoPrneo,線性化後,再通過電穿孔轉染牛胎兒成纖維細胞BFF,用250 μg/mLG418進行藥物篩選,共得到99箇藥物抗性細胞剋隆.對細胞剋隆進行PCR、測序及Southern blotting鑒定,結果錶明,其中的4箇細胞剋隆為中靶細胞,說明牛胎兒成纖維細胞中的Prnp一條等位基因被成功敲除.本研究為牛Prnp的敲除提供瞭一種簡單、安全、有效的方法.
이용계동자포획대중파세포진행부집시제고체세포기인타파효솔상용적책략지일.고제동물적Prnp가사기구유저항Prion병감염적능력.채용계동자포획책략,구건료우Prnp계동자결함형타파재체BoPrneo,선성화후,재통과전천공전염우태인성섬유세포BFF,용250 μg/mLG418진행약물사선,공득도99개약물항성세포극륭.대세포극륭진행PCR、측서급Southern blotting감정,결과표명,기중적4개세포극륭위중파세포,설명우태인성섬유세포중적Prnp일조등위기인피성공고제.본연구위우Prnp적고제제공료일충간단、안전、유효적방법.
