华西医学
華西醫學
화서의학
WEST CHINA MEDICAL JOURNAL
2008年
4期
682-683
,共2页
余守洋%陈米娜%季一飞%夏孝强%李芳华%王德华%崔义元
餘守洋%陳米娜%季一飛%夏孝彊%李芳華%王德華%崔義元
여수양%진미나%계일비%하효강%리방화%왕덕화%최의원
LanCL1%真核表达%原核表达%蛋白纯化%多克隆抗体
LanCL1%真覈錶達%原覈錶達%蛋白純化%多剋隆抗體
LanCL1%진핵표체%원핵표체%단백순화%다극륭항체
目的:获得LanCL1原核和真核表达融合蛋白,制备兔抗LanCL1的多克隆抗体以用于LanCL1基因功能研究.方法:PCR扩增LanCL1 CDS编码区序列,分别亚克隆至原核和真核表达载体上.将真核表达重组质粒用脂质体转染HEK293细胞成功获得了pRK5-LanCL1真核表达融合蛋白.同时将原核表达重组质粒化学转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导GST-LanCL1原核表达融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化,透析浓缩获得高纯度GST-LanCL1融合蛋白.将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体.结果:获得了LanCL1真核和原核表达重组融合蛋白.经亲和纯化后的GST-LanCL1融合蛋白纯度达到90%,BCA蛋白定量浓度约0.44 mg/mL.获得了高效价的特异性兔抗LanCL1多克隆抗体.结论:成功进行了LanCL1融合蛋白的原核和真核表达,并获得抗LanCL1的高灵敏度的多克隆抗体,为LanCL1进一步功能研究奠定了基础.
目的:穫得LanCL1原覈和真覈錶達融閤蛋白,製備兔抗LanCL1的多剋隆抗體以用于LanCL1基因功能研究.方法:PCR擴增LanCL1 CDS編碼區序列,分彆亞剋隆至原覈和真覈錶達載體上.將真覈錶達重組質粒用脂質體轉染HEK293細胞成功穫得瞭pRK5-LanCL1真覈錶達融閤蛋白.同時將原覈錶達重組質粒化學轉化BL21(DE3)感受態細胞,IPTG誘導GST-LanCL1原覈錶達融閤蛋白,穀胱甘肽瓊脂糖珠親和純化,透析濃縮穫得高純度GST-LanCL1融閤蛋白.將純化的融閤蛋白免疫新西蘭大白兔製備多剋隆抗體,併用Western Blot檢測抗體.結果:穫得瞭LanCL1真覈和原覈錶達重組融閤蛋白.經親和純化後的GST-LanCL1融閤蛋白純度達到90%,BCA蛋白定量濃度約0.44 mg/mL.穫得瞭高效價的特異性兔抗LanCL1多剋隆抗體.結論:成功進行瞭LanCL1融閤蛋白的原覈和真覈錶達,併穫得抗LanCL1的高靈敏度的多剋隆抗體,為LanCL1進一步功能研究奠定瞭基礎.
목적:획득LanCL1원핵화진핵표체융합단백,제비토항LanCL1적다극륭항체이용우LanCL1기인공능연구.방법:PCR확증LanCL1 CDS편마구서렬,분별아극륭지원핵화진핵표체재체상.장진핵표체중조질립용지질체전염HEK293세포성공획득료pRK5-LanCL1진핵표체융합단백.동시장원핵표체중조질립화학전화BL21(DE3)감수태세포,IPTG유도GST-LanCL1원핵표체융합단백,곡광감태경지당주친화순화,투석농축획득고순도GST-LanCL1융합단백.장순화적융합단백면역신서란대백토제비다극륭항체,병용Western Blot검측항체.결과:획득료LanCL1진핵화원핵표체중조융합단백.경친화순화후적GST-LanCL1융합단백순도체도90%,BCA단백정량농도약0.44 mg/mL.획득료고효개적특이성토항LanCL1다극륭항체.결론:성공진행료LanCL1융합단백적원핵화진핵표체,병획득항LanCL1적고령민도적다극륭항체,위LanCL1진일보공능연구전정료기출.
