东北农业大学学报
東北農業大學學報
동북농업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST AGRICULTURAL UNIVERSITY
2008年
11期
51-55
,共5页
华秋东%姜成刚%王海%相文华%周建华%陈维多
華鞦東%薑成剛%王海%相文華%週建華%陳維多
화추동%강성강%왕해%상문화%주건화%진유다
SHIV%p27%原核表达%大肠杆菌
SHIV%p27%原覈錶達%大腸桿菌
SHIV%p27%원핵표체%대장간균
利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增p27gag基因,并克隆入pMD18-T载体,测序鉴定;将p27gag基因插入表达栽体pET32a T7启动子下游,构成重组质粒pET32a-p27并使其在大肠杆菌BL21中高效表达.最后利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白,Westem Blot检测活性.结果显示,融合蛋白p27经SDS-PAGE电泳观察可见45ku的明显条带,与预期分子质量大小一致且多以可溶形式表达,目的蛋白占茵体总蛋白的36.8%;经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达98%;经Westem Blot试验检测,证明此融合蛋白p27能与SHTV阳性血清发生特异性反应,具有较好的抗原活性.该研究为进一步开发早期诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定了初步基础. 使其在大肠杆菌BL21中高效表达.最后利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白,Westem Blot检测活性.结果显示,融合蛋白p27经SDS-PAGE电泳观察可见45ku的明显务带,与预期分子质量大小一致且多以可溶形式表达,目的蛋白占茵体总蛋白的36.8%;经镍柱纯化,获得目的蛋白p 7纯度可达98%;经Westem Blot试验检测,证明此融合蛋白p27能与SHTV阳性血清发生特异性反应,具有较好的
利用PCR技術從質粒SHIV89.6P中擴增p27gag基因,併剋隆入pMD18-T載體,測序鑒定;將p27gag基因插入錶達栽體pET32a T7啟動子下遊,構成重組質粒pET32a-p27併使其在大腸桿菌BL21中高效錶達.最後利用固定化金屬離子(Ni2+)配體親和層析技術從錶達蛋白中純化目的蛋白,Westem Blot檢測活性.結果顯示,融閤蛋白p27經SDS-PAGE電泳觀察可見45ku的明顯條帶,與預期分子質量大小一緻且多以可溶形式錶達,目的蛋白佔茵體總蛋白的36.8%;經鎳柱純化,穫得目的蛋白p27純度可達98%;經Westem Blot試驗檢測,證明此融閤蛋白p27能與SHTV暘性血清髮生特異性反應,具有較好的抗原活性.該研究為進一步開髮早期診斷試劑盒和基因工程疫苗奠定瞭初步基礎. 使其在大腸桿菌BL21中高效錶達.最後利用固定化金屬離子(Ni2+)配體親和層析技術從錶達蛋白中純化目的蛋白,Westem Blot檢測活性.結果顯示,融閤蛋白p27經SDS-PAGE電泳觀察可見45ku的明顯務帶,與預期分子質量大小一緻且多以可溶形式錶達,目的蛋白佔茵體總蛋白的36.8%;經鎳柱純化,穫得目的蛋白p 7純度可達98%;經Westem Blot試驗檢測,證明此融閤蛋白p27能與SHTV暘性血清髮生特異性反應,具有較好的
이용PCR기술종질립SHIV89.6P중확증p27gag기인,병극륭입pMD18-T재체,측서감정;장p27gag기인삽입표체재체pET32a T7계동자하유,구성중조질립pET32a-p27병사기재대장간균BL21중고효표체.최후이용고정화금속리자(Ni2+)배체친화층석기술종표체단백중순화목적단백,Westem Blot검측활성.결과현시,융합단백p27경SDS-PAGE전영관찰가견45ku적명현조대,여예기분자질량대소일치차다이가용형식표체,목적단백점인체총단백적36.8%;경얼주순화,획득목적단백p27순도가체98%;경Westem Blot시험검측,증명차융합단백p27능여SHTV양성혈청발생특이성반응,구유교호적항원활성.해연구위진일보개발조기진단시제합화기인공정역묘전정료초보기출. 사기재대장간균BL21중고효표체.최후이용고정화금속리자(Ni2+)배체친화층석기술종표체단백중순화목적단백,Westem Blot검측활성.결과현시,융합단백p27경SDS-PAGE전영관찰가견45ku적명현무대,여예기분자질량대소일치차다이가용형식표체,목적단백점인체총단백적36.8%;경얼주순화,획득목적단백p 7순도가체98%;경Westem Blot시험검측,증명차융합단백p27능여SHTV양성혈청발생특이성반응,구유교호적
