中国奶牛
中國奶牛
중국내우
CHINA DAIRY CATTLE
2007年
9期
2-5
,共4页
祝海宝%郭定宗%李家奎%杨世锦%周东海%杨雪
祝海寶%郭定宗%李傢奎%楊世錦%週東海%楊雪
축해보%곽정종%리가규%양세금%주동해%양설
奶牛%骨钙素%克隆%突变%表达
奶牛%骨鈣素%剋隆%突變%錶達
내우%골개소%극륭%돌변%표체
以奶牛骨组织提取的RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出奶牛骨钙素全长cDNA,然后将扩增产物重组到PMD-18T载体中,测定了全基因的核苷酸序列.序列分析表明,奶牛骨钙素全长cDNA为303bp,编码100个氨基酸,与GenBank中的X53699的序列完全相同.通过加端PCR技术连接单链DNA片段人工定点同义突变,将奶牛骨钙素成熟蛋白基因中的大肠杆菌稀有密码子同义突变为大肠杆菌常用密码子并亚克隆至PET-32a表达载体,转化到宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,成功表达出奶牛骨钙素融合蛋白.
以奶牛骨組織提取的RNA為模闆,利用RT-PCR技術擴增齣奶牛骨鈣素全長cDNA,然後將擴增產物重組到PMD-18T載體中,測定瞭全基因的覈苷痠序列.序列分析錶明,奶牛骨鈣素全長cDNA為303bp,編碼100箇氨基痠,與GenBank中的X53699的序列完全相同.通過加耑PCR技術連接單鏈DNA片段人工定點同義突變,將奶牛骨鈣素成熟蛋白基因中的大腸桿菌稀有密碼子同義突變為大腸桿菌常用密碼子併亞剋隆至PET-32a錶達載體,轉化到宿主菌BL21(DE3)中,經IPTG誘導後,成功錶達齣奶牛骨鈣素融閤蛋白.
이내우골조직제취적RNA위모판,이용RT-PCR기술확증출내우골개소전장cDNA,연후장확증산물중조도PMD-18T재체중,측정료전기인적핵감산서렬.서렬분석표명,내우골개소전장cDNA위303bp,편마100개안기산,여GenBank중적X53699적서렬완전상동.통과가단PCR기술련접단련DNA편단인공정점동의돌변,장내우골개소성숙단백기인중적대장간균희유밀마자동의돌변위대장간균상용밀마자병아극륭지PET-32a표체재체,전화도숙주균BL21(DE3)중,경IPTG유도후,성공표체출내우골개소융합단백.
