中国口腔颌面外科杂志
中國口腔頜麵外科雜誌
중국구강합면외과잡지
CHINA JOURNAL OF ORAL AND MAXILLOFACIAL SURGERY
2008年
3期
188-193
,共6页
孙顺涛%杨宏宇%罗娟%储眉%张键荣%张立兵%桂耀庭
孫順濤%楊宏宇%囉娟%儲眉%張鍵榮%張立兵%桂耀庭
손순도%양굉우%라연%저미%장건영%장립병%계요정
Tca8113%4-1BBL%共刺激分子%质粒构建%基因转染
Tca8113%4-1BBL%共刺激分子%質粒構建%基因轉染
Tca8113%4-1BBL%공자격분자%질립구건%기인전염
目的:克隆人肿瘤坏死因子配体超家族(tumor necrosis factor superfamily,TNFSF)成员4-1BBL基因,构建其真核表达载体,并检测4-1BBL基凶在Tea8113中的表达.方法:从淋巴细胞中提取RNA.用RT-PCR方法将4-1BBL的编码序列cDNA扩增.然后将该基因的编码序列插入真核荧光蛋白载体pEGFP-Cl质粒中.构建成最终的表达载体pEGFP-Cl-4-1BBL.运用脂质体方法将pEGFP-Cl-4-1BBL转染Tea8113细胞.转染24h后,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR和免疫印迹检测4-1BBL在该细胞中的表达.经G418筛选后.用有限稀释法建立稳定高表达的带有4-1BBL基因的Tca8113细胞系.结果:从淋巴细胞中提取的RNA经RT-PCR扩增出目的基因4-1BBL,其全长大小为768bp.测序鉴定该序列与GenBank中的序列丰廿同.转染pEGFP-Cl-4-1BBL载体的靶细胞Tca8113中,荧光显微镜下可见其表达绿色荧光蛋白,RT-PCR方法检测到目的基因4-1BBL的768bp大小的cDNA扩增产物.裂解的4-1BBL/Tea8113基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约27.5Kd的特异性条带.结论:转染4-1BBL基因细胞株的建立,为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础.
目的:剋隆人腫瘤壞死因子配體超傢族(tumor necrosis factor superfamily,TNFSF)成員4-1BBL基因,構建其真覈錶達載體,併檢測4-1BBL基兇在Tea8113中的錶達.方法:從淋巴細胞中提取RNA.用RT-PCR方法將4-1BBL的編碼序列cDNA擴增.然後將該基因的編碼序列插入真覈熒光蛋白載體pEGFP-Cl質粒中.構建成最終的錶達載體pEGFP-Cl-4-1BBL.運用脂質體方法將pEGFP-Cl-4-1BBL轉染Tea8113細胞.轉染24h後,熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的錶達,RT-PCR和免疫印跡檢測4-1BBL在該細胞中的錶達.經G418篩選後.用有限稀釋法建立穩定高錶達的帶有4-1BBL基因的Tca8113細胞繫.結果:從淋巴細胞中提取的RNA經RT-PCR擴增齣目的基因4-1BBL,其全長大小為768bp.測序鑒定該序列與GenBank中的序列豐廿同.轉染pEGFP-Cl-4-1BBL載體的靶細胞Tca8113中,熒光顯微鏡下可見其錶達綠色熒光蛋白,RT-PCR方法檢測到目的基因4-1BBL的768bp大小的cDNA擴增產物.裂解的4-1BBL/Tea8113基因轉染細胞膜蛋白中相對分子質量約27.5Kd的特異性條帶.結論:轉染4-1BBL基因細胞株的建立,為該基因功能的後續研究和單剋隆抗體的研製奠定瞭基礎.
목적:극륭인종류배사인자배체초가족(tumor necrosis factor superfamily,TNFSF)성원4-1BBL기인,구건기진핵표체재체,병검측4-1BBL기흉재Tea8113중적표체.방법:종림파세포중제취RNA.용RT-PCR방법장4-1BBL적편마서렬cDNA확증.연후장해기인적편마서렬삽입진핵형광단백재체pEGFP-Cl질립중.구건성최종적표체재체pEGFP-Cl-4-1BBL.운용지질체방법장pEGFP-Cl-4-1BBL전염Tea8113세포.전염24h후,형광현미경하관찰록색형광단백적표체,RT-PCR화면역인적검측4-1BBL재해세포중적표체.경G418사선후.용유한희석법건립은정고표체적대유4-1BBL기인적Tca8113세포계.결과:종림파세포중제취적RNA경RT-PCR확증출목적기인4-1BBL,기전장대소위768bp.측서감정해서렬여GenBank중적서렬봉입동.전염pEGFP-Cl-4-1BBL재체적파세포Tca8113중,형광현미경하가견기표체록색형광단백,RT-PCR방법검측도목적기인4-1BBL적768bp대소적cDNA확증산물.렬해적4-1BBL/Tea8113기인전염세포막단백중상대분자질량약27.5Kd적특이성조대.결론:전염4-1BBL기인세포주적건립,위해기인공능적후속연구화단극륭항체적연제전정료기출.
