生理学报
生理學報
생이학보
ACTA PHYSIOLOGICA SINICA
2007年
5期
643-650
,共8页
张振英%刘秀华%郭晓笋%刘凤英
張振英%劉秀華%郭曉筍%劉鳳英
장진영%류수화%곽효순%류봉영
缺血后处理%缺氧%钙网蛋白%钙调神经磷酸酶%环孢素A
缺血後處理%缺氧%鈣網蛋白%鈣調神經燐痠酶%環孢素A
결혈후처리%결양%개망단백%개조신경린산매%배포소A
本实验分别在整体和细胞水平观察缺血后处理(ischemic postconditioning,I-postC)对骨骼肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的影响,并探讨钙网蛋白(calreticulin,CRT)介导的信号转导机制.(1)整体实验:健康雄性Wistar大鼠48只,无创动脉夹夹闭右侧股动脉4 h,松夹再灌注12 h或24 h建立大鼠右后肢I/R损伤模型,随机分为I/R组、缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)组(5min缺血/5 min再灌,3个循环)和I-postC组(1 min再灌/1 min缺血,3个循环)(n=16),大鼠左后肢做对照处理.再灌注结束时测定血浆乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、骨骼肌湿干重比值(wet/dry weight ratio,W/D);电镜观察骨骼肌超微结构变化;Western blot检测骨骼肌CRT、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)的表达.(2)细胞培养实验:原代培养Sprague-Dawley乳鼠骨骼肌细胞,随机分为6组:正常对照组、缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)组、缺氧预处理(hypoxic preconditioning,HPC)组、缺氧后处理(hypoxic postconditioning,H-postC)组、CaN抑制剂环孢素A(cyclosporine,CsA)+H/R组和CsA+H-postC组.台盼蓝排斥实验、流式细胞仪检测细胞损伤情况;Western blot检测骨骼肌细胞CRT和CaN的表达.结果显示:(1)在整体动物实验中,I-postC可显著降低血浆LDH活性和组织水肿,骨骼肌超微结构损伤减轻,无细胞核凋亡现象,与IPC组相比无显著差异.I-postC再灌注12 h和24 h CRT表达分别较I/R 12 h和24 h组高4.39倍和1.02倍(P＜0.05),CaN表达分别增高1.96倍和0.63倍(P＜0.05).相关分析显示CRT表达与CaN表达呈正相关(r=0.865,P＜0.01).(2)在细胞培养实验中,H-postC可减轻H/R诱导的骨骼肌细胞凋亡,增加细胞存活率,与HPC组相比无显著差异,CsA可抑制H-postC的保护作用;H-postC可上调CRT和CaN的表达,分别较H/R组增加31.8%(P＜0.05)和6.02%,加入CsA后CaN表达降低44.02%(P＜0.05 vs H-postC).上述整体实验和细胞培养实验结果提示,I-postC与IPC保护作用相似,可显著减轻I/R损伤;CRT上调介导的CaN表达增加可能参与了I-postC的保护作用,抑制CaN表达可降低I-postC的保护作用.
本實驗分彆在整體和細胞水平觀察缺血後處理(ischemic postconditioning,I-postC)對骨骼肌缺血/再灌註(ischemia/reperfusion,I/R)損傷的影響,併探討鈣網蛋白(calreticulin,CRT)介導的信號轉導機製.(1)整體實驗:健康雄性Wistar大鼠48隻,無創動脈夾夾閉右側股動脈4 h,鬆夾再灌註12 h或24 h建立大鼠右後肢I/R損傷模型,隨機分為I/R組、缺血預處理(ischemic preconditioning,IPC)組(5min缺血/5 min再灌,3箇循環)和I-postC組(1 min再灌/1 min缺血,3箇循環)(n=16),大鼠左後肢做對照處理.再灌註結束時測定血漿乳痠脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、骨骼肌濕榦重比值(wet/dry weight ratio,W/D);電鏡觀察骨骼肌超微結構變化;Western blot檢測骨骼肌CRT、鈣調神經燐痠酶(calcineurin,CaN)的錶達.(2)細胞培養實驗:原代培養Sprague-Dawley乳鼠骨骼肌細胞,隨機分為6組:正常對照組、缺氧/複氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)組、缺氧預處理(hypoxic preconditioning,HPC)組、缺氧後處理(hypoxic postconditioning,H-postC)組、CaN抑製劑環孢素A(cyclosporine,CsA)+H/R組和CsA+H-postC組.檯盼藍排斥實驗、流式細胞儀檢測細胞損傷情況;Western blot檢測骨骼肌細胞CRT和CaN的錶達.結果顯示:(1)在整體動物實驗中,I-postC可顯著降低血漿LDH活性和組織水腫,骨骼肌超微結構損傷減輕,無細胞覈凋亡現象,與IPC組相比無顯著差異.I-postC再灌註12 h和24 h CRT錶達分彆較I/R 12 h和24 h組高4.39倍和1.02倍(P＜0.05),CaN錶達分彆增高1.96倍和0.63倍(P＜0.05).相關分析顯示CRT錶達與CaN錶達呈正相關(r=0.865,P＜0.01).(2)在細胞培養實驗中,H-postC可減輕H/R誘導的骨骼肌細胞凋亡,增加細胞存活率,與HPC組相比無顯著差異,CsA可抑製H-postC的保護作用;H-postC可上調CRT和CaN的錶達,分彆較H/R組增加31.8%(P＜0.05)和6.02%,加入CsA後CaN錶達降低44.02%(P＜0.05 vs H-postC).上述整體實驗和細胞培養實驗結果提示,I-postC與IPC保護作用相似,可顯著減輕I/R損傷;CRT上調介導的CaN錶達增加可能參與瞭I-postC的保護作用,抑製CaN錶達可降低I-postC的保護作用.
본실험분별재정체화세포수평관찰결혈후처리(ischemic postconditioning,I-postC)대골격기결혈/재관주(ischemia/reperfusion,I/R)손상적영향,병탐토개망단백(calreticulin,CRT)개도적신호전도궤제.(1)정체실험:건강웅성Wistar대서48지,무창동맥협협폐우측고동맥4 h,송협재관주12 h혹24 h건립대서우후지I/R손상모형,수궤분위I/R조、결혈예처리(ischemic preconditioning,IPC)조(5min결혈/5 min재관,3개순배)화I-postC조(1 min재관/1 min결혈,3개순배)(n=16),대서좌후지주대조처리.재관주결속시측정혈장유산탈경매(lactate dehydrogenase,LDH)활성、골격기습간중비치(wet/dry weight ratio,W/D);전경관찰골격기초미결구변화;Western blot검측골격기CRT、개조신경린산매(calcineurin,CaN)적표체.(2)세포배양실험:원대배양Sprague-Dawley유서골격기세포,수궤분위6조:정상대조조、결양/복양(hypoxia/reoxygenation,H/R)조、결양예처리(hypoxic preconditioning,HPC)조、결양후처리(hypoxic postconditioning,H-postC)조、CaN억제제배포소A(cyclosporine,CsA)+H/R조화CsA+H-postC조.태반람배척실험、류식세포의검측세포손상정황;Western blot검측골격기세포CRT화CaN적표체.결과현시:(1)재정체동물실험중,I-postC가현저강저혈장LDH활성화조직수종,골격기초미결구손상감경,무세포핵조망현상,여IPC조상비무현저차이.I-postC재관주12 h화24 h CRT표체분별교I/R 12 h화24 h조고4.39배화1.02배(P＜0.05),CaN표체분별증고1.96배화0.63배(P＜0.05).상관분석현시CRT표체여CaN표체정정상관(r=0.865,P＜0.01).(2)재세포배양실험중,H-postC가감경H/R유도적골격기세포조망,증가세포존활솔,여HPC조상비무현저차이,CsA가억제H-postC적보호작용;H-postC가상조CRT화CaN적표체,분별교H/R조증가31.8%(P＜0.05)화6.02%,가입CsA후CaN표체강저44.02%(P＜0.05 vs H-postC).상술정체실험화세포배양실험결과제시,I-postC여IPC보호작용상사,가현저감경I/R손상;CRT상조개도적CaN표체증가가능삼여료I-postC적보호작용,억제CaN표체가강저I-postC적보호작용.
