中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2007年
10期
1021-1025
,共5页
彭礼飞%邓莉%杨陈%胡晶晶%甘伟琼%吴亚敏%付汉维
彭禮飛%鄧莉%楊陳%鬍晶晶%甘偉瓊%吳亞敏%付漢維
팽례비%산리%양진%호정정%감위경%오아민%부한유
十二指肠钩虫%抗凝蛋白AduNAP7%原核表达%纯化%抗凝活性
十二指腸鉤蟲%抗凝蛋白AduNAP7%原覈錶達%純化%抗凝活性
십이지장구충%항응단백AduNAP7%원핵표체%순화%항응활성
目的 在大肠杆菌中表达十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7并鉴定抗凝活性.方法 运用RT-PCR扩增十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7成熟蛋白及其组成肽段AduNAP7A、AduNAP7B的编码序列;将编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a及pICET32,构建重组表达质粒;成功构建的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;用镍亲和层析一步纯化融合有硫氧还蛋白(Trx)的目的蛋白;先后用几丁质亲和层析及镍亲和层析两个步骤纯化自切割后带6×his-tag的目的蛋白;用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测纯化表达产物的体外抗凝活性.结果 获得AduNAP7、AduNAP7A及AduNAP7B的编码序列并成功构建了原核表达重组质粒;AduNAP7、AduNAP7A及AduNAP7B均在大肠中得到了高效可溶表达,纯化产物具有一定抗凝活性,它们延长aPTT比延长PT更有效.AduNAP7B的抗凝活性显著强于AduNAP7及AduNAP7A.结论 AduNAP7具有较强抗凝活性,但显著弱于AcAP5、AcaNAP7及AcAPc2.AduNAP7的抗凝效应可能利于钩虫在人体内的吸血寄生生活,其抗凝作用机制有待进一步研究.
目的 在大腸桿菌中錶達十二指腸鉤蟲抗凝蛋白AduNAP7併鑒定抗凝活性.方法 運用RT-PCR擴增十二指腸鉤蟲抗凝蛋白AduNAP7成熟蛋白及其組成肽段AduNAP7A、AduNAP7B的編碼序列;將編碼序列剋隆、連接到原覈錶達載體pET32a及pICET32,構建重組錶達質粒;成功構建的重組錶達質粒轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中,用IPTG誘導錶達;用鎳親和層析一步純化融閤有硫氧還蛋白(Trx)的目的蛋白;先後用幾丁質親和層析及鎳親和層析兩箇步驟純化自切割後帶6×his-tag的目的蛋白;用凝血酶原時間(PT)和活化部分凝血活酶時間(aPTT)檢測純化錶達產物的體外抗凝活性.結果 穫得AduNAP7、AduNAP7A及AduNAP7B的編碼序列併成功構建瞭原覈錶達重組質粒;AduNAP7、AduNAP7A及AduNAP7B均在大腸中得到瞭高效可溶錶達,純化產物具有一定抗凝活性,它們延長aPTT比延長PT更有效.AduNAP7B的抗凝活性顯著彊于AduNAP7及AduNAP7A.結論 AduNAP7具有較彊抗凝活性,但顯著弱于AcAP5、AcaNAP7及AcAPc2.AduNAP7的抗凝效應可能利于鉤蟲在人體內的吸血寄生生活,其抗凝作用機製有待進一步研究.
목적 재대장간균중표체십이지장구충항응단백AduNAP7병감정항응활성.방법 운용RT-PCR확증십이지장구충항응단백AduNAP7성숙단백급기조성태단AduNAP7A、AduNAP7B적편마서렬;장편마서렬극륭、련접도원핵표체재체pET32a급pICET32,구건중조표체질립;성공구건적중조표체질립전화도대장간균BL21(DE3)중,용IPTG유도표체;용얼친화층석일보순화융합유류양환단백(Trx)적목적단백;선후용궤정질친화층석급얼친화층석량개보취순화자절할후대6×his-tag적목적단백;용응혈매원시간(PT)화활화부분응혈활매시간(aPTT)검측순화표체산물적체외항응활성.결과 획득AduNAP7、AduNAP7A급AduNAP7B적편마서렬병성공구건료원핵표체중조질립;AduNAP7、AduNAP7A급AduNAP7B균재대장중득도료고효가용표체,순화산물구유일정항응활성,타문연장aPTT비연장PT경유효.AduNAP7B적항응활성현저강우AduNAP7급AduNAP7A.결론 AduNAP7구유교강항응활성,단현저약우AcAP5、AcaNAP7급AcAPc2.AduNAP7적항응효응가능리우구충재인체내적흡혈기생생활,기항응작용궤제유대진일보연구.
