中国家禽
中國傢禽
중국가금
CHINA POULTRY
2007年
15期
20-23
,共4页
詹爱军%王新卫%王敬师%周庆丰%马静云%毕英佐%于康震
詹愛軍%王新衛%王敬師%週慶豐%馬靜雲%畢英佐%于康震
첨애군%왕신위%왕경사%주경봉%마정운%필영좌%우강진
禽流感病毒%血凝素蛋白%昆虫细胞%克隆
禽流感病毒%血凝素蛋白%昆蟲細胞%剋隆
금류감병독%혈응소단백%곤충세포%극륭
应用DNAStar软件,参照GenBank中注册的AIV H5亚型毒株HA基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H5亚型AIV的HA基因,通过BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点将H5 HA基因插入转移质粒载体pFastBacHTa中,获得重组转移载体pFastBacHTa-H5HA并将其转化DH10Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H5HA,再将其转染昆虫细胞High Five,PCR鉴定证实该基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经SDS-PAGE和Western blotting检测,HA基因在High Five细胞中得到了表达,表达产物大小约为67 ku,而且具有特异的免疫反应性.
應用DNAStar軟件,參照GenBank中註冊的AIV H5亞型毒株HA基因序列,設計瞭一對引物,用RT-PCR方法成功地擴增齣帶雙酶切位點的H5亞型AIV的HA基因,通過BamH Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切位點將H5 HA基因插入轉移質粒載體pFastBacHTa中,穫得重組轉移載體pFastBacHTa-H5HA併將其轉化DH10Bac細胞,與Bacmid髮生位點特異性轉座作用,得到重組穿梭載體Bacmid-H5HA,再將其轉染昆蟲細胞High Five,PCR鑒定證實該基因正確地插入到病毒基因組的多角體蛋白基因啟動子下遊,經SDS-PAGE和Western blotting檢測,HA基因在High Five細胞中得到瞭錶達,錶達產物大小約為67 ku,而且具有特異的免疫反應性.
응용DNAStar연건,삼조GenBank중주책적AIV H5아형독주HA기인서렬,설계료일대인물,용RT-PCR방법성공지확증출대쌍매절위점적H5아형AIV적HA기인,통과BamH Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절위점장H5 HA기인삽입전이질립재체pFastBacHTa중,획득중조전이재체pFastBacHTa-H5HA병장기전화DH10Bac세포,여Bacmid발생위점특이성전좌작용,득도중조천사재체Bacmid-H5HA,재장기전염곤충세포High Five,PCR감정증실해기인정학지삽입도병독기인조적다각체단백기인계동자하유,경SDS-PAGE화Western blotting검측,HA기인재High Five세포중득도료표체,표체산물대소약위67 ku,이차구유특이적면역반응성.
