南京医科大学学报（自然科学版）
南京醫科大學學報（自然科學版）
남경의과대학학보（자연과학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS NANJING
2007年
11期
1209-1212
,共4页
陈仁芳%邢益平%林艳%何晓敏%黄祖瑚%卢山
陳仁芳%邢益平%林豔%何曉敏%黃祖瑚%盧山
진인방%형익평%림염%하효민%황조호%로산
乙型肝炎%MHBs%N-糖基化位点%DNA疫苗
乙型肝炎%MHBs%N-糖基化位點%DNA疫苗
을형간염%MHBs%N-당기화위점%DNA역묘
目的:观察乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白(MHBs)中去糖基化对体液免疫应答的影响.方法:在MHBs核酸疫苗(pSW3891/MHBs/adr)基础上,通过PCR扩增基因修饰法,使MHBs上编码第4、59、146位氨基酸密码子基因由AAT/AAC突变为CAG,从而使AAT/AAC编码的天冬酰胺Asn(N)突变为CAG编码的谷氨酰胺Gln(Q),使得N-糖基化位点NXS、NXT突变为QXS、QXT.构建3株去糖基化核酸疫苗(dG1,去除Asn4处糖基化位点,位于preS2上;dG23,去除Asn59、Asn146处糖基化位点,均位于HBs上;dG123,去除Asn4、Asn59及Asn146位糖基化位点).脂质体法转染293T细胞,Western blot检测,观察它们在293T细胞中瞬时表达的差异;肌肉注射法免疫BALB/c小鼠,观察MHBs去糖基化对小鼠体液免疫应答的影响.结果:adr、dG23转染293T细胞后,在细胞内及上清液中均检测到HBsAg;dG1、dG123转染293T细胞后,在细胞内检测到HBsAg,但是上清液中未测到.adr、dG1及dG23免疫BALB/c小鼠后均产生抗-HBs抗体,最高滴度均达到1∶102 400;dG123几乎无抗体反应(＜1∶200).结论:Asn4去糖基化导致MHBs向细胞外的分泌障碍,但是对小鼠抗-HBs的产生无影响.Asn59、Asn146两处同时去糖基化对MHBs的分泌和小鼠抗-HBs的产生影响轻微.Asn4、Asn59及Asn 146三处同时去糖基化明显影响MHBs的分泌和小鼠抗-HBs的产生.
目的:觀察乙型肝炎病毒(HBV)錶麵抗原中蛋白(MHBs)中去糖基化對體液免疫應答的影響.方法:在MHBs覈痠疫苗(pSW3891/MHBs/adr)基礎上,通過PCR擴增基因脩飾法,使MHBs上編碼第4、59、146位氨基痠密碼子基因由AAT/AAC突變為CAG,從而使AAT/AAC編碼的天鼕酰胺Asn(N)突變為CAG編碼的穀氨酰胺Gln(Q),使得N-糖基化位點NXS、NXT突變為QXS、QXT.構建3株去糖基化覈痠疫苗(dG1,去除Asn4處糖基化位點,位于preS2上;dG23,去除Asn59、Asn146處糖基化位點,均位于HBs上;dG123,去除Asn4、Asn59及Asn146位糖基化位點).脂質體法轉染293T細胞,Western blot檢測,觀察它們在293T細胞中瞬時錶達的差異;肌肉註射法免疫BALB/c小鼠,觀察MHBs去糖基化對小鼠體液免疫應答的影響.結果:adr、dG23轉染293T細胞後,在細胞內及上清液中均檢測到HBsAg;dG1、dG123轉染293T細胞後,在細胞內檢測到HBsAg,但是上清液中未測到.adr、dG1及dG23免疫BALB/c小鼠後均產生抗-HBs抗體,最高滴度均達到1∶102 400;dG123幾乎無抗體反應(＜1∶200).結論:Asn4去糖基化導緻MHBs嚮細胞外的分泌障礙,但是對小鼠抗-HBs的產生無影響.Asn59、Asn146兩處同時去糖基化對MHBs的分泌和小鼠抗-HBs的產生影響輕微.Asn4、Asn59及Asn 146三處同時去糖基化明顯影響MHBs的分泌和小鼠抗-HBs的產生.
목적:관찰을형간염병독(HBV)표면항원중단백(MHBs)중거당기화대체액면역응답적영향.방법:재MHBs핵산역묘(pSW3891/MHBs/adr)기출상,통과PCR확증기인수식법,사MHBs상편마제4、59、146위안기산밀마자기인유AAT/AAC돌변위CAG,종이사AAT/AAC편마적천동선알Asn(N)돌변위CAG편마적곡안선알Gln(Q),사득N-당기화위점NXS、NXT돌변위QXS、QXT.구건3주거당기화핵산역묘(dG1,거제Asn4처당기화위점,위우preS2상;dG23,거제Asn59、Asn146처당기화위점,균위우HBs상;dG123,거제Asn4、Asn59급Asn146위당기화위점).지질체법전염293T세포,Western blot검측,관찰타문재293T세포중순시표체적차이;기육주사법면역BALB/c소서,관찰MHBs거당기화대소서체액면역응답적영향.결과:adr、dG23전염293T세포후,재세포내급상청액중균검측도HBsAg;dG1、dG123전염293T세포후,재세포내검측도HBsAg,단시상청액중미측도.adr、dG1급dG23면역BALB/c소서후균산생항-HBs항체,최고적도균체도1∶102 400;dG123궤호무항체반응(＜1∶200).결론:Asn4거당기화도치MHBs향세포외적분비장애,단시대소서항-HBs적산생무영향.Asn59、Asn146량처동시거당기화대MHBs적분비화소서항-HBs적산생영향경미.Asn4、Asn59급Asn 146삼처동시거당기화명현영향MHBs적분비화소서항-HBs적산생.
