中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
1期
11-15
,共5页
金明飞%徐伟东%黄静%金丽%王嘉%叶海峰%吴自荣
金明飛%徐偉東%黃靜%金麗%王嘉%葉海峰%吳自榮
금명비%서위동%황정%금려%왕가%협해봉%오자영
SD序列-基因串联%高效表达%小肽%胸腺肽α1
SD序列-基因串聯%高效錶達%小肽%胸腺肽α1
SD서렬-기인천련%고효표체%소태%흉선태α1
人工合成含有SD序列、胸腺肽α1(Tα1)基因、纯化标签和酶切位点的DNA序列作为构建元件,利用同尾酶将其依次克隆到pET-32a(+)中,得到含有1～8个不同重复数目的含SD序列基因的串联表达载体,利用PCR初步鉴定和进一步的测序证实序列完全正确.进而利用lacZ基因作为指示基因,将带有SD序列的lacZ基因克隆到不同Tα1基因串数载体末尾,利用蓝白斑实验验证启动子后不同SD序列的效率,证实串联载体中的各个SD序列均能有效启动翻译.在此基础上对各串表达载体进行摇瓶发酵,SDS-PAGE电泳检测证实各串均可正确表达Tα1,且为可溶性表达,为小肽原核高效表达提出了新方法,有望成为小肽高效表达的新途径.
人工閤成含有SD序列、胸腺肽α1(Tα1)基因、純化標籤和酶切位點的DNA序列作為構建元件,利用同尾酶將其依次剋隆到pET-32a(+)中,得到含有1～8箇不同重複數目的含SD序列基因的串聯錶達載體,利用PCR初步鑒定和進一步的測序證實序列完全正確.進而利用lacZ基因作為指示基因,將帶有SD序列的lacZ基因剋隆到不同Tα1基因串數載體末尾,利用藍白斑實驗驗證啟動子後不同SD序列的效率,證實串聯載體中的各箇SD序列均能有效啟動翻譯.在此基礎上對各串錶達載體進行搖瓶髮酵,SDS-PAGE電泳檢測證實各串均可正確錶達Tα1,且為可溶性錶達,為小肽原覈高效錶達提齣瞭新方法,有望成為小肽高效錶達的新途徑.
인공합성함유SD서렬、흉선태α1(Tα1)기인、순화표첨화매절위점적DNA서렬작위구건원건,이용동미매장기의차극륭도pET-32a(+)중,득도함유1～8개불동중복수목적함SD서렬기인적천련표체재체,이용PCR초보감정화진일보적측서증실서렬완전정학.진이이용lacZ기인작위지시기인,장대유SD서렬적lacZ기인극륭도불동Tα1기인천수재체말미,이용람백반실험험증계동자후불동SD서렬적효솔,증실천련재체중적각개SD서렬균능유효계동번역.재차기출상대각천표체재체진행요병발효,SDS-PAGE전영검측증실각천균가정학표체Tα1,차위가용성표체,위소태원핵고효표체제출료신방법,유망성위소태고효표체적신도경.
