中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2000年
4期
514-519
,共6页
p15%CKI%细胞周期%细胞增殖
p15%CKI%細胞週期%細胞增殖
p15%CKI%세포주기%세포증식
通过DNA体外重组和转染技术,将已构建好的含有p15基因的质粒pXJ-41-p15转染p15缺失的人黑色素瘤细胞A 375,经G 418筛选出阳性单克隆,并经PCR、Western等检测,证明建立了p15稳定高表达的细胞模型.生长曲线和FCM实验表明,与对照组细胞相比,实验组细胞增殖能力战弱,G1期细胞增加,S期细胞减少.同时,细胞血清依赖性有所恢复,在软琼脂的集落形成能力下降,显示出细胞部分恶性表型逆转.进一步免疫印迹实验表明,癌基因c-myc的蛋白表达水平明显下降.CyclinD1的表达受到抑制,而CDK4的表达则基本不变.以上结果显示出,p15基因高表达能够抑制人黑色素瘤细胞的增殖及部分恶性表型,负调细胞周期进程,而c-Myc蛋白和G1期引擎分子CyclinD1表达的被抑制可能是p15负调细胞增殖的分子机理之一.
通過DNA體外重組和轉染技術,將已構建好的含有p15基因的質粒pXJ-41-p15轉染p15缺失的人黑色素瘤細胞A 375,經G 418篩選齣暘性單剋隆,併經PCR、Western等檢測,證明建立瞭p15穩定高錶達的細胞模型.生長麯線和FCM實驗錶明,與對照組細胞相比,實驗組細胞增殖能力戰弱,G1期細胞增加,S期細胞減少.同時,細胞血清依賴性有所恢複,在軟瓊脂的集落形成能力下降,顯示齣細胞部分噁性錶型逆轉.進一步免疫印跡實驗錶明,癌基因c-myc的蛋白錶達水平明顯下降.CyclinD1的錶達受到抑製,而CDK4的錶達則基本不變.以上結果顯示齣,p15基因高錶達能夠抑製人黑色素瘤細胞的增殖及部分噁性錶型,負調細胞週期進程,而c-Myc蛋白和G1期引擎分子CyclinD1錶達的被抑製可能是p15負調細胞增殖的分子機理之一.
통과DNA체외중조화전염기술,장이구건호적함유p15기인적질립pXJ-41-p15전염p15결실적인흑색소류세포A 375,경G 418사선출양성단극륭,병경PCR、Western등검측,증명건립료p15은정고표체적세포모형.생장곡선화FCM실험표명,여대조조세포상비,실험조세포증식능력전약,G1기세포증가,S기세포감소.동시,세포혈청의뢰성유소회복,재연경지적집락형성능력하강,현시출세포부분악성표형역전.진일보면역인적실험표명,암기인c-myc적단백표체수평명현하강.CyclinD1적표체수도억제,이CDK4적표체칙기본불변.이상결과현시출,p15기인고표체능구억제인흑색소류세포적증식급부분악성표형,부조세포주기진정,이c-Myc단백화G1기인경분자CyclinD1표체적피억제가능시p15부조세포증식적분자궤리지일.
