CAJ | 학술논문

目的:建立人树突状细胞(DC)的cDNA文库,通过大规模随机测序克隆免疫新分子.方法:来源于正常人外周血的单核细胞,体外经GM-CSF和IL-4培养,扩增出高纯度的DC,抽提纯化mRNA,转录成cDNA,定向插入pSPORT2.0载体,建立人DC的cDNA质粒文库;用ABI377全自动测序仪对该文库进行随机测序,将得到的EST在Sun-E450服务器中与EMBL及Swissprot数据库进行同源性比较,筛选出代表未知基因EST,然后在GCG软件中进行分析,对重要的未知EST克隆其全长cDNA.结果:所扩增的DC经流式细胞仪分析高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、B7、CDla和CD83等表面标志,能强烈刺激同种异体T淋巴细胞的体外增殖反应;建立的DC cDNA文库92%以上克隆有平均1.6 kb大小的插入片段;从所测的12 000余条EST中筛选出代表未知基因的3 000余条,克隆到109条全长新基因,包括属于细胞因子、细胞因子受体、趋化因子和粘附分子等家族的免疫新分子,部分全长基因已在Genebank中登录.结论:成功建立了人DC的cDNA基因文库及其大规模随机测序体系,并克隆到免疫分子.
목적:건립인수돌상세포(DC)적cDNA문고,통과대규모수궤측서극륭면역신분자.방법:래원우정상인외주혈적단핵세포,체외경GM-CSF화IL-4배양,확증출고순도적DC,추제순화mRNA,전록성cDNA,정향삽입pSPORT2.0재체,건립인DC적cDNA질립문고;용ABI377전자동측서의대해문고진행수궤측서,장득도적EST재Sun-E450복무기중여EMBL급Swissprot수거고진행동원성비교,사선출대표미지기인EST,연후재GCG연건중진행분석,대중요적미지EST극륭기전장cDNA.결과:소확증적DC경류식세포의분석고표체MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、B7、CDla화CD83등표면표지,능강렬자격동충이체T림파세포적체외증식반응;건립적DC cDNA문고92%이상극륭유평균1.6 kb대소적삽입편단;종소측적12 000여조EST중사선출대표미지기인적3 000여조,극륭도109조전장신기인,포괄속우세포인자、세포인자수체、추화인자화점부분자등가족적면역신분자,부분전장기인이재Genebank중등록.결론:성공건립료인DC적cDNA기인문고급기대규모수궤측서체계,병극륭도면역분자.