中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2002年
1期
14-17
,共4页
刘殿武%朱冰%王晓波%闫会敏%丁月新
劉殿武%硃冰%王曉波%閆會敏%丁月新
류전무%주빙%왕효파%염회민%정월신
mRNA差异显示%猬迭宫绦虫%PCR%基因%阶段表达
mRNA差異顯示%猬迭宮縚蟲%PCR%基因%階段錶達
mRNA차이현시%위질궁조충%PCR%기인%계단표체
目的查找猬迭宫绦虫幼虫-裂头蚴阶段特异性表达基因.方法裂头蚴和成虫组织用异硫氢酸胍-步法提取总RNA,用DNA酶去除总RNA中污染的DNA.使用T12MA、T12MC、T12MG和T12MT 4种锚定引物反转录合成cDNA,再用1种随机引物与上述4种锚定引物在含同位素的反应液中进行PCR反应.将PCR产物用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,经放射自显影后,从凝胶上选出裂头蚴与成虫不同的差异带,PCR扩增后经杂交试验鉴定出不同种类的基因片段;以筛选出的差异带作探针,分别与裂头蚴和成虫RNA进行Northern杂交证实裂头蚴阶段表达基因;将差异带测序后与GenBank中的序列进行同源性比较.结果从凝胶中共选出11条差异带.将回收的11条带再经PCR扩增和杂交试验,从中选出3种不同的基因片段.经Northern杂交证实片段1和片段2为裂头蚴特异表达基因,而片段3为裂头蚴和成虫共同表达的基因.3个基因片段测序后与GenBank中的基因进行同源性分析,基因片断1和2无同源序列;基因片段3与多种生物的28S rRNA同源.结论通过mRNA差异显示技术查找出2个裂头蚴阶段特异性表达基因片段.
目的查找猬迭宮縚蟲幼蟲-裂頭蚴階段特異性錶達基因.方法裂頭蚴和成蟲組織用異硫氫痠胍-步法提取總RNA,用DNA酶去除總RNA中汙染的DNA.使用T12MA、T12MC、T12MG和T12MT 4種錨定引物反轉錄閤成cDNA,再用1種隨機引物與上述4種錨定引物在含同位素的反應液中進行PCR反應.將PCR產物用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離,經放射自顯影後,從凝膠上選齣裂頭蚴與成蟲不同的差異帶,PCR擴增後經雜交試驗鑒定齣不同種類的基因片段;以篩選齣的差異帶作探針,分彆與裂頭蚴和成蟲RNA進行Northern雜交證實裂頭蚴階段錶達基因;將差異帶測序後與GenBank中的序列進行同源性比較.結果從凝膠中共選齣11條差異帶.將迴收的11條帶再經PCR擴增和雜交試驗,從中選齣3種不同的基因片段.經Northern雜交證實片段1和片段2為裂頭蚴特異錶達基因,而片段3為裂頭蚴和成蟲共同錶達的基因.3箇基因片段測序後與GenBank中的基因進行同源性分析,基因片斷1和2無同源序列;基因片段3與多種生物的28S rRNA同源.結論通過mRNA差異顯示技術查找齣2箇裂頭蚴階段特異性錶達基因片段.
목적사조위질궁조충유충-렬두유계단특이성표체기인.방법렬두유화성충조직용이류경산고-보법제취총RNA,용DNA매거제총RNA중오염적DNA.사용T12MA、T12MC、T12MG화T12MT 4충묘정인물반전록합성cDNA,재용1충수궤인물여상술4충묘정인물재함동위소적반응액중진행PCR반응.장PCR산물용변성취병희선알응효전영분리,경방사자현영후,종응효상선출렬두유여성충불동적차이대,PCR확증후경잡교시험감정출불동충류적기인편단;이사선출적차이대작탐침,분별여렬두유화성충RNA진행Northern잡교증실렬두유계단표체기인;장차이대측서후여GenBank중적서렬진행동원성비교.결과종응효중공선출11조차이대.장회수적11조대재경PCR확증화잡교시험,종중선출3충불동적기인편단.경Northern잡교증실편단1화편단2위렬두유특이표체기인,이편단3위렬두유화성충공동표체적기인.3개기인편단측서후여GenBank중적기인진행동원성분석,기인편단1화2무동원서렬;기인편단3여다충생물적28S rRNA동원.결론통과mRNA차이현시기술사조출2개렬두유계단특이성표체기인편단.
