中国人兽共患病杂志
中國人獸共患病雜誌
중국인수공환병잡지
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2004年
4期
279-283
,共5页
陈唯军%陈香蕊%张雪颖%牛东升%陈梅玲%崔红%魏文进%温博海
陳唯軍%陳香蕊%張雪穎%牛東升%陳梅玲%崔紅%魏文進%溫博海
진유군%진향예%장설영%우동승%진매령%최홍%위문진%온박해
恙虫病东方体Gilliam株%PCR%56kDa基因%克隆表达%Western-blotting
恙蟲病東方體Gilliam株%PCR%56kDa基因%剋隆錶達%Western-blotting
양충병동방체Gilliam주%PCR%56kDa기인%극륭표체%Western-blotting
目的表达恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)Gillam株56kDa外膜蛋白,探索其作为诊断抗原的可能性.方法采用PCR方法,从Ot.Glliam株菌种基因组DNA中扩增出56kDa外膜蛋白基因片段,将目的基因片段定向插入原核表达载体pQE30,再用重组质粒转化大肠杆菌,最后用IPTG诱导转化菌,SDS-PAGE和Western-blotting检测重组质粒目的基因的表达.结果 (1)获得长约1500bp的Ot.Gilliam株56kDa外膜蛋白基因,SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量5.6×104处有表达带;(2)DNA测序证明重组质粒pQE30/56中插入的基因片段的序列与已报告的Ot.Gilliam株56kDa外膜蛋白基因序列基本一致.(3)诱导表达菌体经超声破碎后,显示目的蛋白主要以包涵体形式存在;(4)免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子量约为5.6×104的独特蛋白带,该蛋白约占细菌蛋白总量的29.4%.结论 Ot.Gilliam株56kDa外膜蛋白基因在大肠杆菌中获得了高效表达,表达的重组蛋白具有免疫反应性,与Ot.Gilliam株感染的小鼠血清在免疫印迹中呈阳性反应.
目的錶達恙蟲病東方體(Orientia tsutsugamushi)Gillam株56kDa外膜蛋白,探索其作為診斷抗原的可能性.方法採用PCR方法,從Ot.Glliam株菌種基因組DNA中擴增齣56kDa外膜蛋白基因片段,將目的基因片段定嚮插入原覈錶達載體pQE30,再用重組質粒轉化大腸桿菌,最後用IPTG誘導轉化菌,SDS-PAGE和Western-blotting檢測重組質粒目的基因的錶達.結果 (1)穫得長約1500bp的Ot.Gilliam株56kDa外膜蛋白基因,SDS-PAGE檢測錶達產物,在相對分子量5.6×104處有錶達帶;(2)DNA測序證明重組質粒pQE30/56中插入的基因片段的序列與已報告的Ot.Gilliam株56kDa外膜蛋白基因序列基本一緻.(3)誘導錶達菌體經超聲破碎後,顯示目的蛋白主要以包涵體形式存在;(4)免疫印跡顯示該重組質粒轉化的大腸桿菌有一相對分子量約為5.6×104的獨特蛋白帶,該蛋白約佔細菌蛋白總量的29.4%.結論 Ot.Gilliam株56kDa外膜蛋白基因在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達,錶達的重組蛋白具有免疫反應性,與Ot.Gilliam株感染的小鼠血清在免疫印跡中呈暘性反應.
목적표체양충병동방체(Orientia tsutsugamushi)Gillam주56kDa외막단백,탐색기작위진단항원적가능성.방법채용PCR방법,종Ot.Glliam주균충기인조DNA중확증출56kDa외막단백기인편단,장목적기인편단정향삽입원핵표체재체pQE30,재용중조질립전화대장간균,최후용IPTG유도전화균,SDS-PAGE화Western-blotting검측중조질립목적기인적표체.결과 (1)획득장약1500bp적Ot.Gilliam주56kDa외막단백기인,SDS-PAGE검측표체산물,재상대분자량5.6×104처유표체대;(2)DNA측서증명중조질립pQE30/56중삽입적기인편단적서렬여이보고적Ot.Gilliam주56kDa외막단백기인서렬기본일치.(3)유도표체균체경초성파쇄후,현시목적단백주요이포함체형식존재;(4)면역인적현시해중조질립전화적대장간균유일상대분자량약위5.6×104적독특단백대,해단백약점세균단백총량적29.4%.결론 Ot.Gilliam주56kDa외막단백기인재대장간균중획득료고효표체,표체적중조단백구유면역반응성,여Ot.Gilliam주감염적소서혈청재면역인적중정양성반응.
