畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2004年
6期
670-674
,共5页
彭贵青%陈焕春%钱平%李祥敏%洪琦%顾贫
彭貴青%陳煥春%錢平%李祥敏%洪琦%顧貧
팽귀청%진환춘%전평%리상민%홍기%고빈
口蹄疫%抗原表位%原核表达%免疫原性
口蹄疫%抗原錶位%原覈錶達%免疫原性
구제역%항원표위%원핵표체%면역원성
口蹄疫病毒主要免疫原性基因VP1的B细胞和T细胞抗原表位位于其C末端,参照Taiwanse97(AJ294928)设计了1对特异性引物,扩增出VP1基因C末端.序列分析表明:其C末端长285 bp,编码74个氨基酸,与O/HKN/12/91、O/PEN/TAW/99核苷酸和氨基酸同源性分别为95%、93%和96%、93%;利用同尾酶Xho Ⅰ、Sa Ⅰ将VP1基因C末端串连起来;再将单拷贝和双拷贝C末端基因插入到原核表达载体pGEX-KG后,转化BL21(DE3),在IPTG诱导下获得表达,经Western blot检测证实表达产物具有活性.以表达产物包被ELISA板,初步建立了特异、敏感的ELISA诊断方法.同时用表达产物免疫Balb/c小鼠,能产生一定的抗O型口蹄疫病毒的抗体.
口蹄疫病毒主要免疫原性基因VP1的B細胞和T細胞抗原錶位位于其C末耑,參照Taiwanse97(AJ294928)設計瞭1對特異性引物,擴增齣VP1基因C末耑.序列分析錶明:其C末耑長285 bp,編碼74箇氨基痠,與O/HKN/12/91、O/PEN/TAW/99覈苷痠和氨基痠同源性分彆為95%、93%和96%、93%;利用同尾酶Xho Ⅰ、Sa Ⅰ將VP1基因C末耑串連起來;再將單拷貝和雙拷貝C末耑基因插入到原覈錶達載體pGEX-KG後,轉化BL21(DE3),在IPTG誘導下穫得錶達,經Western blot檢測證實錶達產物具有活性.以錶達產物包被ELISA闆,初步建立瞭特異、敏感的ELISA診斷方法.同時用錶達產物免疫Balb/c小鼠,能產生一定的抗O型口蹄疫病毒的抗體.
구제역병독주요면역원성기인VP1적B세포화T세포항원표위위우기C말단,삼조Taiwanse97(AJ294928)설계료1대특이성인물,확증출VP1기인C말단.서렬분석표명:기C말단장285 bp,편마74개안기산,여O/HKN/12/91、O/PEN/TAW/99핵감산화안기산동원성분별위95%、93%화96%、93%;이용동미매Xho Ⅰ、Sa Ⅰ장VP1기인C말단천련기래;재장단고패화쌍고패C말단기인삽입도원핵표체재체pGEX-KG후,전화BL21(DE3),재IPTG유도하획득표체,경Western blot검측증실표체산물구유활성.이표체산물포피ELISA판,초보건립료특이、민감적ELISA진단방법.동시용표체산물면역Balb/c소서,능산생일정적항O형구제역병독적항체.
